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1988年Green和Frankel各自独立发现HIV-TAT( human immunodeficiency virus trans-activator of transcription,HIV-TAT)蛋白具有穿透生物膜的能力,该蛋白全长86个氨基酸。TAT蛋白具有穿透生物膜的区域称为蛋白转导域(Protein transduction domain, PTD),由11个氨基酸组成,研究表明TAT是一个极好的蛋白质、多肽及基因的转运载体。TAT的11个氨基酸转导序列是目前为止所发现的最短的蛋白质转导序列。细胞凋亡是机体清除多余、变异或肿瘤细胞的一种主动、程序化的生理过程。该过程的紊乱与肿瘤的发生密切相关。近年来,病毒基因产物对细胞凋亡的调节作用逐渐引起人们的重视。鸡贫血病毒(chicken anemia virus, CAV)就是一种诱导细胞凋亡的新病毒。VP3蛋白(Apoptin,亦称凋亡素)源于鸡贫血病毒,由121个氨基酸组成,能够特异性诱导肿瘤细胞的凋亡,令人感兴趣的是VP3对正常的人和鼠的二倍体细胞无任何毒副作用,因此VP3在抗肿瘤方面具有巨大的潜在优势和广阔的应用前景。本研究通过分子克隆常规方法构建了TAT-VP3、TAT-GFP及TAT-GFP-VP3等3种融合蛋白的pET28a原核表达载体,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍金属鳌合层析柱纯化获得融合蛋白。通过蛋白转导实验观察其透膜效应,并观察融合蛋白对肿瘤细胞凋亡的诱导效应。结果显示:通过荧光显微镜观察,发现融合蛋白TAT-GFP及TAT-GFP-VP3能进入体外培养的细胞,在荧光显微镜下可见细胞内有绿色荧光。融合蛋白TAT-VP3及TAT-GFP-VP3可诱导体外培养的HepG2细胞凋亡。