背景:子宫腺肌病是育龄期及围绝经期女性常见的良性非瘤性的的疾病。其生物学行为类似于恶性肿瘤。近年来,研究证明M2巨噬细胞诱导的上皮间质转化(EMT)在肿瘤进展中作用显著。而先前的部分研究显示巨噬细胞聚集在腺肌症异位病灶中,另有部分研究显示腺肌症病灶中有上皮间质转化(EMT)的现象。因此,我们推测巨噬细胞及其诱导的上皮间质转化(EMT)在腺肌症发病过程中可能具有重要的意义。第一部分巨噬细胞与子宫腺肌病病灶中上皮间质转化现象关系密切研究目的:1.验证子宫腺肌症异位病灶中存在上皮间质转化(EMT)的现象。2.检测巨噬细胞在子宫腺肌症异位病灶中的分布。3.观察子宫腺肌症异位病灶中上皮间质转化(EMT)与巨噬细胞分布之间的关系。研究方法:使用免疫组织化学染色法和免疫荧光法对收集的正常子宫内膜、子宫腺肌症在位内膜和异位内膜临床样本进行染色,检测E-cadherin,N-cadherin,CK7,vimentin,S100A4和CD68在标本中的表达情况,分析异位病灶中上皮间质转化的比例,同时分析巨噬细胞的分布密度与上皮间质转化相关分子表达量之间的关系。研究结果:1.子宫腺肌症异位病灶中存在上皮间质转化(EMT)的现象,且比例较高。2.子宫在腺肌症异位病灶及在位内膜中有大量的巨噬细胞浸润,其分布与月经周期无关。3.在子宫腺肌症异位腺体周围,巨噬细胞的分布密度同上皮细胞中上皮性标志物表达呈负相关,同间质标志物表达呈正相关。结论:巨噬细胞浸润与子宫腺肌病病灶中的上皮间质转化(EMT)现象关系密切。巨噬细胞是腺肌症异位病灶发生上皮间质转化(EMT)的重要参与者。第二部分巨噬细胞诱导子宫内膜上皮细胞发生上皮间质转化(EMT)研究目的:1.探讨巨噬细胞能否诱导Ishikawa细胞发生上皮间质转化(EMT)。2.探讨巨噬细胞能否诱导子宫腺肌症在位内膜及正常子宫内膜发生上皮间质转化(EMT)。研究方法:将巨噬细胞与Ishikawa细胞、腺肌症在位内膜上皮细胞、正常子宫内膜上皮细胞共培养。蛋白质印迹法(Western Blot)检测共培养前后E-cadherin,N-cadherin,CK7,vimentin,S100A4 在 Ishikawa 细胞、腺肌症在位内膜上皮细胞、正常子宫内膜上皮细胞中的表达。通过细胞侵袭实验检测Ishikawa细胞与巨噬细胞共培养发生上皮间质转化(EMT)后的侵袭能力的改变。通过普通光学显微镜和透射电镜(TEM)检测观察Ishikawa细胞与巨噬细胞共培养发生上皮间质转化(EMT)后的细胞形态及细胞间连接的改变。通过流式细胞术(FCM)检测Ishikawa细胞与巨噬细胞共培养发生上皮间质转化(EMT)后的细胞增殖和凋亡改变。最后通过基因芯片表达分析来检测Ishikawa细胞与巨噬细胞共培养发生上皮间质转化(EMT)过程中信号通路的变化。研究结果:1.巨噬细胞诱导Ishikawa细胞发生上皮间质转化(EMT)。2.巨噬细胞诱导子宫腺肌症在位内膜及正常子宫内膜上皮细胞发生上皮间质转化(EMT)。3.子宫腺肌症在位内膜与正常子宫内膜相比发生上皮间质转化(EMT)的潜力更显著。结论:巨噬细胞可以诱导子宫内膜上皮细胞发生上皮间质转化(EMT)。与正常的子宫内膜相比,腺肌症在位内膜在与巨噬细胞共培养后发生上皮间质转化(EMT)更具潜力。第三部分共培养体系中上皮细胞诱导巨噬细胞向M2极化研究目的:1.探讨Ishikawa细胞能否诱导巨噬细胞向M2极化。2.探讨子宫腺肌症在位内膜及正常子宫内膜能否诱导巨噬细胞向M2极化。研究方法:通过流式细胞术(FCM)和聚合酶链式反应(PCR)检测与Ishikawa细胞、腺肌症在位内膜上皮细胞、正常子宫内膜上皮细胞共培养前后的巨噬细胞中CD163,IL-10,MMP12 的表达。研究结果:1.Ishikawa细胞诱导巨噬细胞向M2极化。2.子宫腺肌症在位内膜及正常子宫内膜均能诱导巨噬细胞向M2极化。3.与腺肌症在位内膜相比,正常子宫内膜上皮细胞诱导巨噬细胞向M2极化作用更明显。结论:Ishikawa细胞,子宫腺肌症在位内膜及正常子宫内膜上皮细胞均能诱导巨噬细胞向M2型转化。同时,正常子宫内膜上皮细胞诱导巨噬细胞向M2极化作用明显强于腺肌症在位子宫内膜上皮细胞。