论文部分内容阅读
第一部分闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折对大鼠肺组织和局部炎症介质的影响目的：建立大鼠闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折诱发肺损伤模型，观察对照组、股骨干骨折组、闭合性脑损伤组、脑损伤合并骨折组在肺脏病理组织学和局部炎症介质表达上的变化和区别。方法：构建大鼠闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折诱发肺损伤模型，通过HE染色法观察各组肺脏组织学变化，双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）测定肺组织TNF-a、IL-6炎症介质。结果：大鼠闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折可导致肺泡及肺间质水肿，肺泡间隔增宽等，其局部炎症因子表达水平及病理评分与其余三组有统计学差异（p＜0.05）。结论：1、成功建立大鼠闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折诱发肺损伤模型。2、脑损伤合并骨折组大鼠肺脏损伤程度明显大于对照组、股骨干骨折组及闭合性脑损伤组。第二部分细胞自噬及其相关基因在闭合性脑外伤合并单侧股骨干骨折时大鼠肺脏中的表达目的：观察闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折时，大鼠肺脏细胞自噬是否存在，比较不同时间点细胞自噬的表达情况。方法：将大鼠随机分为两组，每组各五个时间点：6H，12H，24H，48H，5D。创伤组按照第一部分的方法制作闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折模型，对照组只钻孔颅骨而不损伤脑组织，在相应时间点处死大鼠，通过透射电镜观察细胞自噬，用Real Time-PCR检测自噬相关基因Beclin1，LC3B的mRNA表达情况，采用免疫组织化学检测自噬相关蛋白Beclin1和LC3B的表达情况。结果：透射电镜发现闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折后的各个时间点，在肺脏上皮细胞中均可以发现自噬小体，且自噬相关基因Beclin1，LC3B的mRNA表达较对照组明显升高，在伤后48H达到高峰，至少持续至伤后5D均有表达，而自噬相关蛋白Beclin1，LC3B的表达和其mRNA表达基本同步，且定位于细胞质内。结论：1、闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折后，在肺组织内可以检测到细胞自噬小体的存在。2、闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折后肺组织内自噬相关基因Beclin1，LC3B的mRNA表达量明显增加，从伤后6H开始，持续上升至伤后48H到达高峰，至伤后5D时仍明显高于对照组。3、自噬相关蛋白Beclin1，LC3B的表达定位于细胞质内。第三部分自噬抑制剂3-MA对闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折时大鼠肺组织及局部炎症介质变化的影响目的：研究自噬抑制剂3-MA对闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折时大鼠肺组织自噬相关蛋白Beclin1和LC3B表达的影响，及对肺脏病理组织学和局部炎症介质表达的影响。方法：将大鼠随机分为三组：对照组，单纯创伤组，3-MA干预组，每组分为伤后6H，12H，24H，48H，5D5个时间点，使用Real Time-PCR方法检测各个时间点Beclin1和LC3B基因表达的变化，使用免疫组织化学方法观察个时间点Beclin1和LC3B蛋白的表达，通过HE染色法观察各组肺脏组织学变化，ELISA测定各组肺组织局部TNF-a、IL-6炎症介质表达的变化及区别。结果：在各个时间点上，3-MA组较单纯创伤组Beclin1，LC3B的mRNA表达均明显降低，差异有统计学意义（p＜0.05）。3-MA组的肺病理评分及局部炎症介质TNF-a，IL-6的表达较单纯创伤组均明显降低，差异有统计学意义（p＜0.05）。结论：细胞自噬抑制剂3-MA可以明显抑制闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折时大鼠肺脏自噬相关基因及蛋白Beclin1和LC3B的表达。同时3-MA可以减轻肺组织病理学损伤程度及局部炎症介质TNF-a，IL-6的表达，因此细胞自噬很可能在闭合性脑损伤合并单侧股骨干骨折诱发肺损伤的发生发展过程中发挥了重要的促进作用。