SL2细胞中凋亡相关蛋白的鉴定与功能初步研究

来源 :武汉大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:lele
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
细胞凋亡是一种发生在多细胞生物体中受到严格控制的程序性细胞死亡,负责消除不需要的细胞,在个体发育与衰老及防御病原体中发挥重要作用。海灰翅夜蛾是一种食谱广泛的植食性昆虫,是热带和亚热带地区最具破坏性的害虫之一。SL2细胞是来源于海灰翅夜蛾卵巢的细胞系,常用于昆虫杆状病毒感染细胞的研究。Sf9细胞是草地贪夜蛾的卵巢细胞系。草地贪夜蛾和海灰翅夜蛾均属于鳞翅目昆虫,且亲缘关系相近。Ac MNPV感染SL2细胞时,细胞内产生较低水平的多角体蛋白且细胞发生凋亡。与此相反,Ac MNPV感染Sf9细胞时,细胞内产生高水平的多角体蛋白且细胞不发生凋亡。这一现象表明SL2细胞与Sf9细胞由病毒感染引起的凋亡机制可能存在差异。SL2细胞中仅有一个效应caspase被鉴定,其凋亡信号通路研究几乎处于空白阶段。细胞凋亡主要通过内源通路和外源通路进行,二者都需caspase的活化。Caspase是半胱氨酸依赖性天冬氨酸蛋白酶,绝大部分细胞凋亡需要依赖于caspase。IAP(凋亡抑制蛋白家族)是细胞中重要的凋亡抑制蛋白,缺失IAP会引起多种细胞的死亡,IAP可以直接结合到caspase并抑制其活化,也可以通过结合上游Reaper家族蛋白,阻止其对caspase的激活。本研究利用RACE技术鉴定了SL2细胞中三个新的caspase(SlDronc、SlDredd及Sl-caspase-2)和两个IAP(SlIAP1-1及Sl IAP1-2),并对其生化特性和功能进行了初步研究。SlDronc是起始caspase,具有多种典型的起始caspase特征,是昆虫中Dronc的同源物。SlDronc在大肠杆菌中表达和纯化时发生自催化切割,并对合成的起始caspase底物Ac-VEID-AFC切割活性最高。SlDronc能够切割海灰翅夜蛾和草地贪夜蛾中的效应caspase(Sl-caspase-1和Sf-caspase-1)。在SL2细胞中瞬时表达SlDronc引起细胞凋亡且下调Sldronc可以减少UV照射引发的SL2细胞凋亡。此外,Sl-caspase-1可以切割SlDronc,缺失前结构域增强SlDronc诱导凋亡能力,Sl IAPs抑制过表达SlDronc引起的SL2细胞凋亡。SlDredd也属于起始caspase,与昆虫中的Dredd同源物相似性较高。SlDredd在大肠杆菌中表达和纯化时发生自催化切割并能切割合成的起始caspase底物,其最适底物是Ac-YVAD-AFC。在SL2细胞中瞬时表达SlDredd能引起细胞凋亡,而且UV照射引发SL2细胞凋亡的同时可以检测到SlDredd的激活形式逐渐增多。这些结果表明SlDredd参与SL2细胞凋亡的过程。Sl-caspase-2氨基酸序列具有效应caspase特性,但Sl-caspase-2在大肠杆菌中表达和纯化时不发生切割,对所测试的caspase底物均无切割活性,瞬时表达Slcaspase-2也不能引起SL2细胞凋亡。不过,本文结果发现Sl-caspase-2能被起始caspase SlDronc切割。SlIAP1-1和Sl IAP1-2均含有两个BIR结构域(BIR1和BIR2)和一个RING结构域。SlIAP1-1和Sl IAP1-2可以被Sl-caspase-1和SlDronc切割。SlIAP1-1和Sl IAP1-2抑制SlDronc引起的SL2细胞凋亡。综上所述,我们鉴定了SL2细胞中三个新的caspase和两个IAP并对其功能进行了初步研究,研究结果为完善海灰翅夜蛾细胞凋亡信号通路、进一步研究海灰翅夜蛾细胞凋亡机制奠定了基础。
其他文献
在本文中,我们分别对四元数、双曲几何、等距变换群给出了一些简要的介绍,得到了在四元数双曲空间上,等距变换群的二元生成子群离散的一个必要条件,即Shimizu引理在四元数双曲空间的一个推广。Shimizu引理给出了非初等群离散的必要条件。全文的安排如下:在第一章中,我们提供了问题的背景、意义以及我们得到的一些主要结果。在第二章中,我们主要介绍本文所要用到的一些四元数基本知识如四元数Hemitian型
学位
第一部分:牙源性角化囊肿的复发和预后因素目的:分析565例牙源性角化囊肿(OKC)的流行病学特征,研究可能与复发相关的预后因素,并分析复发性OKC(r OKC)的特点。材料和方法:对2003年至2015年间治疗的565例OKC患者进行了回顾性研究。评价与复发相关的预后因素,包括病变大小、皮质穿孔、囊肿是否累及牙齿、炎症、病变部位、性别和子囊等变量。统计比较复发率。结果:患者年龄范围为7至81岁(平
自从上世纪60年代美国科学家发现大震前震中上空附近电离层存在显著扰动现象以来,有关震前电离层异常的震例研究和统计分析研究就逐渐发展起来,研究表明震前电离层异常现象往往具有短临时间特征,这为地震预报,特别是地震短临预报开辟了一个新的研究和分析思路。但必须要承认,震前电离层异常研究还处于探索和实验阶段,我们对震前电离层异常扰动的形成机理还不清楚,需要继续研究,同时还需要通过更多大量的震例研究和统计分析
非线性光学是光学的一个重要的分支,描述了光与介质的相互作用过程。自从1961年Franken等人首次实现二次谐波以来,非线性光学过程在许多科学技术领域发挥着重要作用。人们通过利用非线性过程对激光器的辐射频率进行有效调控,基于这一原理的激光器可用波长范围可以扩展到可见光谱的短波长区域。目前有效的频率转换过程多是在宏观尺度的无机双折射晶体中实现的,过大的晶体尺寸阻碍了片上可调谐非线性光学的发展。介质纳
移动对象之间相对动态关系的建模和分析是地理科学领域的重要研究问题,对地理数据库、空间索引和地理空间服务等方面的研究存在十分重要的影响,并广泛应用于应急管理、位置服务与物流、公共安全、城市交通等领域。GIS数据模型对空间对象及其相互关系进行抽象和描述,是对移动对象进行相对动态关系分析的基础。而信息技术的快速发展产生了大量移动对象位置数据,为GIS数据模型的数据处理性能提出了更高的要求。传统GIS数据
城市精细化三维模型是数字中国的基础设施,城市建筑三维模型更是各类城市经济社会大数据关联、汇聚和融合的空间载体,已经广泛应用于智慧城市管理、社会综合治理和应急决策指挥等领域。目前城市场景三维重建主要以多视影像或点云数据为主进行交互编辑,存在效率低下、工作量大、成本高等问题,城市建筑三维模型的自动化快速重建技术亟待突破:以二维影像为主的建模方式需要人工识别和提取场景重建所需的准确的三维矢量信息;单平台
光学天线作为一个新兴的光学概念,类似于无线和微波天线,可以在亚波长范围内对光束进行有效的操控。在光学频率下,它可以充当辐射电磁波能量和局域电磁场能量之间的转换器。目前对于光学天线的研究已经得到了广泛关注,其研究范围包括:探测、传感、光谱分析和信息编码等多个领域。现如今亟待解决的是发展可直接电驱动的光学天线,这需要匹配合适的驱动源。近期研究人员利用相邻金属间的隧道结实现了隧穿电子激发的光学天线源,提
数字高程模型(Digital Elevation Model,“DEM”)作为基础地理信息产品、基础国情的地理空间框架,在许多应用领域里发挥着巨大作用。当前世界各国围绕提供现势性好、准确度高、内容完备的地形数据,都在大力加强DEM数据库的建设。我国进入“十二五”以来,提出国家基础地理信息数据库动态联动更新,旨在对既有的1:5万、1:25万、1:100万国家基础地理信息数据库进行持续动态更新。然而在
瓜伊科库蚊病毒(GCXV)属于Jingmen病毒组,是一种基因分节的正链RNA多分体病毒。它们的基因组具有与黄病毒属高度同源的核酸序列,一些学者根据其基因组信息,认为可以划入到黄病毒科,成为其中独特的一组。Jingmen病毒组的发现和建组比较晚、研究较少。目前的主要研究方向是新病毒的发现、鉴定和系统发育分析,有关其编码蛋白的具体功能的相关研究并不充分。对于RNA病毒来说,其基因组RNA有多个顺式作