【摘 要】
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目的:探讨如何从C57BL/6小鼠骨髓细胞中分离淋巴内皮祖细胞（LEPCs）,并研究对其鉴定方法,同时研究骨髓间充质干细胞（MSCs）对淋巴内皮祖细胞（LEPCs）增殖作用的影响。方法:使用贴壁技术提取小鼠骨髓MSCs,同时进行流式细胞术检验细胞表面特异性标记物及进行分化实验鉴定细胞;通过贴壁技术获取小鼠骨髓24小时后贴壁细胞,待其增殖融合至80%-90%后,使用Tryple Express酶对贴
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目的:探讨如何从C57BL/6小鼠骨髓细胞中分离淋巴内皮祖细胞（LEPCs）,并研究对其鉴定方法,同时研究骨髓间充质干细胞（MSCs）对淋巴内皮祖细胞（LEPCs）增殖作用的影响。方法:使用贴壁技术提取小鼠骨髓MSCs,同时进行流式细胞术检验细胞表面特异性标记物及进行分化实验鉴定细胞;通过贴壁技术获取小鼠骨髓24小时后贴壁细胞,待其增殖融合至80%-90%后,使用Tryple Express酶对贴壁细胞消化1分钟,去除消化掉的细胞,剩余细胞继续培养,待其再次融合至80%-90%时,进行1:2传代,将获得的第三代细胞进行流式细胞术检测其表面特异性标记物,并对其进行淋巴管成管分化实验,鉴定细胞;取上述两种细胞,等比接种于共培养系统内,实验组为下室LEPCs,上室MSCs,对照组为下室LEPCs,上室为含10%胎牛血清（FBS）的LG-DMEM完全培养基;适时共培养后去除上室,分别使用MTT比色法和Ed U荧光标记法检测下室内的LEPCs的增殖能力。结果:我们获取的MSCs,诱导后可分别分化成脂肪细胞、骨细胞、软骨细胞,其表面特异性标记物为:Sca-1、CD29双阳性率为:97.33%±2.72%,CD45、CD11b双阴性率为:95.87%±1.07%,符合目前关于MSCs鉴定的相关报道;我们所获取的LEPCs,在体外诱导后,可形成典型的微管样结构,并且经过多次传代后可形成“鹅卵石”样的典型细胞形态;其表面特异性标记物为:CD34、CD113双阳性率为:87.17%±1.77%;CD113、VEGFR-3双阳性率为:85.17%±1.65%;CD34、VEGFR-3双阳性率为:83.77%±0.42%,符合相关文献关于LEPCs的报道。传统MTT比色法结果显示:与对照组相比,实验组的A490 OD值均比对照组高,其中48 h、96h、120h所得OD值差异具有统计学意义（P＜0.05）;Ed U增殖试剂盒实验显示:实验组处于DNA合成期的细胞的比例（12.03%±4.63%）高于对照组（8.48%±1.98%）,差异具有统计学意义（P=0.01）。结论:1、利用贴壁法可获取较高纯度的LEPCs。2、非直接接触共培养后,MSCs可促进LEPCs的增殖。
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