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蛋白质的折叠复性和分离纯化是生产基因重组药物和高附加值基因产品的关键步骤。本文针对蛋白质复性过程的两个关键因素(促进二硫键形成和抑制蛋白质聚集),开展蛋白质复性助剂的研究和蛋白质复性与集成纯化方法的研发。针对二硫键形成问题,从模拟蛋白质二硫键异构酶(PDI)的疏水区域和正电区域出发,设计得到模拟寡肽RKCGCFF。研究表明,与传统氧化剂GSSG和短肽RKCGC相比,RKCGCFF能够更好地提高变性还原溶菌酶氧化复性的速率和收率,且对较高浓度的溶菌酶也具有较好的辅助复性的效果。分析认为,由于RKCGCFF分子中同时引入了疏水区域和正电区域,使其在结构和性质上都更加接近于PDI,因此使其在促进二硫键形成的同时,又具有一定的抑制蛋白质聚集的效果,亦即类似于PDI的分子伴侣功能。针对蛋白质聚集问题,基于前人研究发现的同电荷微球能够有效抑制蛋白质聚集,且其效果与介质的电荷密度正相关的结论,本研究在二氧化硅纳米粒子(SNPs)表面接枝聚乙烯亚胺分子(PEI)并二次修饰2-二乙氨基氯乙基(DEAE),得到一系列高电荷密度以及高比表面积的阳离子纳米颗粒。利用它们辅助带正电荷的溶菌酶的氧化复性的研究表明,高电荷密度的纳米粒子能够在极低的介质添加量时高效辅助同电荷溶菌酶的复性。与PGMA微米球相比,介质用量下降了96%。由此证实,具有高电荷密度和比表面积的纳米介质更适合应用于同电荷介质辅助蛋白质复性的方法中。在上述研究的基础上,针对重组蛋白在复性中的纯化问题,本研究在琼脂糖凝胶介质(Sepharose FF)表面修饰亚氨基二乙酸(IDA),制备得到一种金属螯合介质IDA-Sepharose FF。利用IDA的负电性质和金属螯合性质,建立了一种同电荷辅助复性与集成纯化的方法,用于辅助六聚组氨酸标记的重组增强型绿色荧光蛋白(6×his-EGFP)包含体的复性与纯化。研究表明,IDA-Sepharose FF介质能够快速高效地辅助6×his-EGFP包含体的复性,并且在辅助复性的同时,能够吸附部分杂蛋白,具有初步纯化的效果。特别是在复性之后,通过引入少量镍离子即可实现对6×his-EGFP的特异性吸附,最终得到高收率(85%)以及高纯度(93%)的目标蛋白。进一步采用原子转移自由基聚合(ATRP)接枝方法,制备得到高IDA接枝量的纳米粒子,并且发现具有高电荷密度的金属螯合纳米粒子能够进一步提高6×his-EGFP包含体的复性与纯化效果,体现出其在实际应用中的更大优势。