“双固一通”电针法对老年阳虚证模型大鼠肝脏影响的研究

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目的:探讨“双固一通”电针法对老年阳虚证模型大鼠肝脏的保护作用及其作用机制,为针灸防治老年阳虚证的作用机制提供一定的依据。方法:选用5月龄清洁级SD雄性大鼠48只,随机分为正常组、模型组、“双固一通”电针组、电针对照组,除正常组外,其余3组大鼠每日皮下注射D-半乳糖40d后再肌肉注射氢化可的松7d制作老年阳虚证模型。“双固一通”电针组取“关元”、“后三里”、“百会”,电针对照组取“中极”、“阴陵泉”、“印堂”,每周治疗6次,其余两组老鼠同时行抓取固定,不治疗,共4周结束。治疗结束后以游泳力竭实验潜伏期判定大鼠抗疲劳能力;采用Clark氧电极法检测肝脏线粒体的呼吸功能,包括Ⅲ态呼吸耗氧速率(R3)、Ⅳ态呼吸耗氧速率(R4)、呼吸控制率(respiratory control ratio, RCR)以及磷氧比值(P/0),采用透射电镜观察肝组织超微结构变化,免疫组化法检测肝脏组织p16、p21蛋白的表达,并比较各组之间的差异。结果:1.老年阳虚证模型组大鼠平均游泳力竭时间、RCR、P/0较正常组均明显降低,差异具有显著性统计学意义(P<0.01),经电针治疗后,上述指标均增高,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),而EA组与EAc组之间差异亦具有统计学意义(P<0.05);2.模型组大鼠肝细胞核染色质浓缩,聚集于核膜边,’呈块状,细胞质中线粒体肿胀变性,部分和大部分嵴融合消失,细胞呈现凋亡状态;经电针治疗后,大鼠肝脏组织超微结构明显得到改善,肝细胞核染色质分布较均匀,核膜完整,细胞质中少数线粒体稍肿胀变性,粗面内质网成群分布于核周及线粒体周围,无脱颗粒现象;“双固一通”电针组改善效果优于电针对照组;3.模型组肝组织p16、p21蛋白阳性细胞积分比正常组均明显升高,差异具有显著性统计学意义(均P<0.01);经电针治疗后,EA组与EAc组大鼠p16、p21蛋白表达较模型组均下调,差异具有统计学意义(P<0.05,或P<0.01),而EA组下调p16蛋白的效果优于EAc组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:1.“双固一通”电针法能明显改善老年阳虚证模型大鼠抗疲劳能力。2.“双固一通”电针法能降低老年阳虚证模型大鼠肝脏细胞线粒体Ⅳ态呼吸耗氧速率(R4),提高其呼吸控制率(RCR)及磷氧比值(P/0),改善肝脏线粒体呼吸功能,继而改善机体代谢,且“双固一通”电针疗效优于“中极”、“阴陵泉”、“印堂”配穴电针治疗。3.“双固一通”电针法与电针对照组均能改善老年阳虚证模型大鼠肝脏组织超微结构的变化,抑制肝细胞凋亡,且“双固一通”电针法优于电针对照组;4.“双固一通”电针法与电针对照组均能有效下调肝脏组织中p16、p21蛋白的表达,且在p16蛋白表达的调节中,“双固一通”电针法优于电针对照组。
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