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黑果枸杞(Lycium ruthenicum Murray),属于茄科(Solanaceae)枸杞属(Lycium)植物,分布于我国青海、新疆等地。黑果枸杞果实具有很高的营养和药用价值,但其产量较低且价格昂贵。近年来研究发现,黑果枸杞叶片提取物也具有与果实相似的生物活性和营养药用价值,其中多糖类物质可能是其功效成分之一,而目前对黑果枸杞叶多糖的性质,结构和活性系统性研究报道相对较少。本文以青海柴达木盆地产黑果枸杞叶片为原料,对黑果枸杞叶多糖的提取、分离纯化、理化性质、结构、体外抗氧化活性和免疫活性进行系统研究,为进一步阐述多糖结构与功能关系奠定理论基础,也为黑果枸杞的综合开发利用提供科学依据。主要研究结果如下:1.黑果枸杞叶多糖的提取及分离纯化以黑果枸杞叶为原料,用热水提取、乙醇沉淀、Sevage试剂除游离蛋白质、过氧化氢脱色素、透析冻干后得到淡黄色粉末状的黑果枸杞叶粗多糖CLRLP。CLRLP经DEAE-52离子交换柱分离和SephadexG-100凝胶柱纯化后得到五个多糖组分,LRLP1-A、LRLP2-A、LRLP3、LRLP4-A和LRLP5-A。2.黑果枸杞叶多糖的理化性质研究采用高效凝胶色谱法、气相色谱、红外光谱等对黑果枸杞叶多糖的理化性质进行研究。结果表明,五个组分的黑果枸杞叶多糖都具有均一性,平均分子量依次为34.9kDa、 52.5kDa、79.4 kDa、135.1 kDa和197.5 kDa;都是以阿拉伯糖和半乳糖为主要组成的中性多糖。苯酚硫酸法测得其糖含量依次为96.8%、97.1%、98.2%、96.6%和95.1%;考马斯亮蓝法测得蛋白含量依次为2.1%、1.8%、1.3%、2.3%和3.9%。3.黑果枸杞叶多糖的结构采用甲基化、乙酰化、部分酸水解等化学分析方法和气相色谱、气相色谱-质谱联用、电喷雾电离质谱和核磁等仪器分析方法对黑果枸杞叶多糖的结构进行分析。结果显示,五个多糖组分均为具有多分支结构的阿拉伯半乳聚糖,且主链都由(1→6)Galp重复单元结构组成,并且大多数的半乳糖C-3位存在分支;而各组分的支链却差异很大,主要表现在糖组成、连接方式、聚合度等方面;非还原末端以Araf为主。4.黑果枸杞叶多糖的体外抗氧化活性采用还原能力、清除自由基能力、对Cu2+/H2O2损伤BSA蛋白的保护及对H2O2损伤HeLa细胞的保护评价方法,对黑果枸杞叶粗多糖CLPRP及各纯化组分多糖进行体外抗氧化活性分析。结果显示,它们在不同考察水平中均具有不同程度的抗氧化能力。其中,组分LRLP3在还原能力、清除羟自由基、清除超氧阴离子自由基及对H2O2诱导的HeLa细胞损伤的保护方面抗氧化活性表现最强;组分LRLP2-A对Cu2+/H2O2诱导的BSA蛋白氧化损伤的保护作用最强;组分LRLP4-A清除DPPH自由基的能力最强;粗多糖CLRLP除了在羟自由基清除方面,其它方面的抗氧化活性与各组分多糖相比均最弱。5.黑果枸杞叶多糖的体外免疫调节活性采用体外脾淋巴细胞和小鼠巨噬细胞RAW 264.7免疫活性实验对黑果枸杞叶粗多糖及各组分多糖的免疫活性进行评价。结果表明,粗多糖和各组分多糖均具有不同程度的免疫调节功能。黑果枸杞叶多糖对未经诱导和经ConA或LPS诱导的正常小鼠体外脾淋巴细胞增殖具有显著的促进作用;其中,组分LRLP4-A的促进增殖作用最强;粗多糖CLPLR促进增殖作用最弱。此外,黑果枸杞叶多糖可以激活小鼠RAW 264.7巨噬细胞,增强其吞噬能力,促进NO及细胞因子TNF-α分泌能力,还可增强RAW 264.7细胞的细胞毒活性,通过免疫活性因子间接发挥抗肿瘤作用;LRLP3刺激RAW 264.7后,细胞内的iNOS和TNF-α mRNA表达量升高。在巨噬细胞免疫活性实验中,组分LRLP3的免疫活性最高,而粗多糖CLRLP的免疫活性最低。