[目的]研究IDO和IFNγ在异基因造血干细胞移植后病人中的表达情况,了解IDO活性与aGVHD的严重程度及IFN的关系,探讨IDO的活性检测在诊断aGHVD及aGHVD分级中的作用[方法]逆转录PCR法检测89例异基因造血干细胞患者和8个正常人单个核细胞中IDOmRNA的表达情况；反相高效液相色谱法检测血浆中IDO的活性；ELISA检测IFNγ的水平。[结果]在74个有aGVHD的患者中55个(74.32%)检测到IDOmRNA的表达,在26个无aGVHD患者仅有2个检测到IDOmRNA的表达,8个健康人中未检测到IDO表达；血浆IDO的活性在(?)GVHD病人远高于无aGVHD病人(4.74±3.35vs1.79±1.02；P<0.0001)或者健康人(4.74±3.35vs1.77±0.22；P<0.0001),重度aGVHD(Ⅲ/Ⅳ级)患者IDO活性高于轻度aGVHD(Ⅰ/Ⅱ级)患者(6.57±3.34vs2.46±1.41；P<0.0001).同时,在aGVHD病人血浆IFNγ的水平也是增高的(P=0.0043)；aGVHD缓解后IDO的活性下降,当aGVHD复发时,IDO的活性又会升高；血浆IDO的活性与IFN的水平相关(r=0.8288；P<0.0001),利用ROC曲线分析,IDO活性的曲线下面积高于IFNγ(0.852vs0.694),IDO的灵敏度和特异度分别是81%和78%,而IFNγ的灵敏度和特异度分别是41%和93%。[结论]aGVHD病人外周血单个核细胞有IDOmRNA表达；血浆IDO的活性增高在aGVHD病人且与aGVHD的严重程度相关；结合血浆IFN水平,IDO活性可能作为诊断和评估异基因造血干细胞移植后aGVHD的生物标志；干预IDO途径可能是一个可用的方法去治疗激素无效的aGVHD。[目的]检测吲哚胺2,3加氧酶(IDO)在aGVHD小鼠各组织器官的表达情况,探究IDO与aGVHD靶器官损伤的关系,为调节色氨酸代谢途径抑制aGVHD反应甚至诱导免疫耐受做初步探索。[方法]以BALB/c (H-2b)雌性小鼠为受者,接受致死剂量的Y射线(8.0Gy)全身照射后,输注雄性C57BL/6(H-2d)供鼠的骨髓细胞和脾细胞,同时设立同基因移植对照组,观察受鼠的体征和存活时间,进行aGVHD临床评分,aGVHD评分≥7时,处死小鼠,应用反相高效液相色谱法(HPLC)检测血浆中色氨酸(Trp)和其代谢产物犬尿氨酸(Kyn)的浓度,以及IDO的活性,用RT-PCR和免疫组化方法检测各组织中IDOmRNA与蛋白的表达水平,流式细胞学检测外周血CD4+/CD25+Treg细胞比例。[结果]异基因移植组小鼠血浆中Trp浓度明显低于同基因移植小鼠(P<0.05),而Kyn浓度高于对照小鼠(P<0.05),IDO活性明显较对照组高(P<0.01)。结肠和肺IDO mRNA表达水平高于对照小鼠(P<0.01),两组小鼠小肠IDO表达水平很低对比无明显差异,皮肤和肝脏IDO mRNA表达不明显。免疫组化结果显示：aGVHD小鼠肺脏和结肠上皮细胞和血管内皮细胞高表达IDO；小肠组织IDO的表达差别不明显；皮肤血管内皮细胞检测到IDO的表达且组织中散在IDO阳性单个核细胞；肝脏血管内皮细胞表达IDO,且汇管区周围散在分布IDO阳性的单个核细胞；对照小鼠各组织IDO的表达低或不表达。[结论]IDO的表达在aGVHD靶器官组织水平的免疫调节中有重要作用,血管内皮细胞作为最先接触到异体反应T细胞的受体细胞,参与了这一作用；调节色氨酸代谢途径可能是治疗aGVHD一个有效对策。[目的]通过吲哚胺2,3加氧酶(IDO)代谢局部色氨酸被认为是调节T细胞免疫的一个重要机制。3,4-DAA是一个人工合成的有活性的邻氨基苯甲酸酸衍生物,已经被证实对治疗Thl介导的自身免疫性疾病例如多发性硬化是有效的。我们的目的是研究3,4-DAA在治疗aGVHD的效果及它可能的作用机制[方法]构建一个小鼠的aGVHD模型,在骨髓移植后立即或aGVHD启动时,腹腔注射3,4-DAA,每只小鼠200mg/kg/day,连续用14天；定期记录aGVHD的表现和小鼠的存活情况；HE染色评估靶器官的病理损伤；反相高效液相色谱法和Elisa检测血浆中IDO的活性及细胞因子的水平。[结果]骨髓移植后给药3,4-DAA明显的降低aGVHD的严重程度和组织学评分；与对照组相比,给予3,4-DAA预防和治疗组小鼠的生存期延长,在3,4-DAA治疗组小鼠,血浆IFNγ和IL-2的水平下降,而IDO的活性剂IL-10的水平提高。与体内实验一致,在体外,3,4-DAA也能够抑制脾脏T淋巴细胞分泌IFNγ和IL-2。[结论]3,4-DAA能够减轻小鼠实验性aGVHD通过调节辅助T淋巴细胞分化,这一特性使它成为一个可能备选的药物来用于临床预防和治疗GVHD。[目的]探讨干扰素-γ(IFNγ)诱导小鼠肺微血管内皮细胞吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)的表达情况,及体外对T细胞增殖的影响。[方法]组织块贴壁法培养小鼠肺微血管内皮细胞,进行形态特征观察,并进行系列鉴定,经过传代纯化后,分别用不同浓度的IFNy诱导作用微血管内皮细胞,Western blot和RT-PCR分别测定未经处理的内皮细胞以及IFNγ和或VP-16处理后内皮细胞IDO基因及蛋白表达水平。反相高效液相色谱法检测细胞培养上清中色氨酸、犬尿氨酸的水平,从而检测IDO活性的水平。在体外将肺微血管内皮细胞与小鼠脾脏T淋巴细胞共培养,T淋巴细胞用羧基荧光素乙酰乙酸琥珀酰亚胺酯(CFSE)标记,流式细胞仪测定T细胞的增殖情况,[结果]获得的内皮细胞具有规律的鹅卵石样形态,CD31相关抗原间接免疫荧光染色阳性而且在透射电镜观察到Weilel—palade小体。IFNy处理后的微血管内皮细胞IDOmRNA及蛋白表达增高,IDO活性水平随IFNy的浓度的增大逐渐提高。VP-16作用后,在IFNy刺激下,肺微血管内皮细胞表达IDO的能力减低,无IFNγ刺激,微血管内皮细胞不表达IDO。IFNγ处理后的微血管内皮细胞能够抑制T细胞的增殖(P<0.05)而未处理的内皮细胞对T细胞的增殖抑制作用不显著。[结论]IFNγ能够通过诱导IDO的表达增强内皮细胞在体外对T淋巴细胞增殖的抑制作用。