葛根和葛花的解酒护肝作用及其机理研究

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课题主要研究葛根和葛花对急性和慢性酒精肝损伤小鼠的影响,分析比较葛根和葛花的解酒护肝作用,并在此基础上探讨其作用机理。急性酒精中毒实验主要通过测定小鼠的醒酒时间和血醇浓度变化分析比较葛根和葛花的解酒效果。先采用水提和醇提法分别提取葛根和葛花并通过冷冻干燥得到4种葛根和葛花粗提物(PRW/PRE/PFW/PFE)。模型组按10mL/kg.bw体积灌胃生理盐水,低中高各葛根和葛花实验组分别按2.5、7.5、10g/kg.bw生药剂量灌胃相应的粗提物溶液;30min后各实验组按5.75g/kg.bw灌胃酒精。结果表明葛根和葛花对均具有一定的解酒预防效果;且葛根的解酒预防效果优于葛花,葛根醇提物优于葛根水提物,高剂量组优于低剂量组。慢性酒精肝损伤实验在评价葛根提取物(PR)和葛花提取物(PF)对小鼠生理病理指标影响的基础上,从氧化应激、脂质代谢、炎症信号传导等3个方面探讨PR和PF的作用机理。将小鼠分为7组:空白组、模型组、PR低高剂量组(100和300mg/kg.bw总黄酮PR)、PF低高剂量组(100和300mg/kg.bw总黄酮PF)和阳性组(FB,500mg/kg.bw)。空白组灌胃蒸馏水,其它各组灌胃50%乙醇;1h后,空白组和模型组灌胃6mL/kg.bw蒸馏水,其它各组灌胃相应剂量的提取物溶液,11周后处死小鼠。结果表明PR和PF可有效抑制谷草转氨酶和谷丙转氨酶活性,减轻肝细胞肿胀,减少脂滴,表现出较好的护肝效果。在氧化应激方面,PR和PF可提高肝组织的抗氧化能力,并降低内毒素(LPS)浓度及抑制细胞色素P4502E1(CYP2E1)表达,减少自由基产生,从而减轻氧化应激导致的肝损伤。且PF提高抗氧化的能力和对CYP2E1表达的抑制作用强于PR。在脂质代谢方面,PR和PF均可上调腺苷酸活化蛋白激酶α2(AMPKα2)表达量,但两者的差别在于:在活化AMPKα2的作用下,PR可显著抑制固醇调节因子结合蛋白1c(SREBP-1c)转录活性,进而抑制甘油三酯(TG)合成。而PF可能作为一种配体激活过氧化物酶体增殖物激活受体α (PPARα)或受AMPKα2激活作用进而提高PPARα mRNA表达量,促进脂肪酸氧化分解,达到降低脂的作用。且PR降脂作用优于PF。在炎症信号传导方面,PR和PF可降低Toll样受体4(TLR4)及髓样分化蛋白88(Myd88)表达量,抑制炎症信号放大,同时还可提高核因子κB抑制剂α (IκBα)水平,进而与活化的核因子κB (NF-κB)结合形成NF-κB/IκBα复合物,从而有效抑制酒精性肝炎。且PF的抑炎作用强于PR。以上结果表明葛根和葛花均具有一定的解酒护肝作用。葛根主要通过上调AMPKα2表达量进而抑制SREBP-1c的转录活性,抑制TG合成。葛花一方面通过提高肝组织抗氧化能力,抑制CYP2E1表达,并降低炎症信号分子TLR4及Myd88表达水平,减轻氧化应激和炎症性肝损伤;另一方面葛花可能作为一种配体激活PPARα或受AMPKα2激活作用从而提高PPARα表达量,促进脂肪酸氧化分解,降低脂质水平。
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