山药多糖提取、结构鉴定及对肠道菌群影响的初步研究

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目的优化山药多糖提取、纯化工艺,对山药均一多糖组分进行结构表征并考察山药多糖对部分肠道菌种体外生长活性的影响。方法以山药多糖提取率为指标,采用星点设计-响应面法优化冷水浸提、碱液浸提山药多糖提取工艺并制得冷水浸提和碱液浸提山药粗多糖(CYPN、CYPA);制得的山药粗多糖采用三氯乙酸(TCA)法和盐酸(HCl)法除蛋白,以蛋白脱除率及多糖保留率为指标,分别优化并比较筛选出山药多糖除蛋白的最佳方法;脱蛋白后山药多糖经双氧水氧化法除色素,透析法去除小分子杂质;初步纯化的山药多糖(CYPN、CYPA)分别经DEAE-52纤维素柱层析分离制得CYPN、CYPA均一多糖组分;山药均一多糖经高效凝胶渗透色谱法测定纯度及其分子量;高效液相色谱法测定山药均一多糖中单糖组成及其摩尔比;结合红外光谱法、核磁共振光谱法分析其结构;采用比浊法考察其对部分肠道菌种(双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、粪肠球菌)体外生长活性的影响。结果山药多糖冷水浸提的最佳工艺为液料比10.30:1(V/V),提取时间12.26h,提取次数3次,山药多糖(CYPN)提取率为2.89%,多糖含量为57.43%;碱液浸提的最佳工艺为液料比10.23:1,提取时间为7.59h,碱液浓度为0.48mol·L-1,山药多糖(CYPA)提取率为24.23%,多糖含量为48.66%;TCA法除蛋白最佳条件为三氯乙酸浓度3%,此时脱蛋白率95.03%,多糖保留率24.19%;盐酸法除蛋白最佳条件为pH值为2.0,此时脱蛋白率为93.95%,多糖保留率为67.74%,经比较可知盐酸法是山药粗多糖除蛋白的最佳方法;初步纯化的山药多糖(CYPN、CYPA)DEAE-52纤维素柱层析分离得到五个均一多糖组分(CYPN-I、CYPN-II、CYPA-I、CYPA-II、CYPA-III),经高效凝胶渗透色谱法检测,均出现一个色谱峰,证明这五个组分为均一多糖,并测得其分子量分别为7907Da、54200Da、60256Da、76913Da、47753Da;高效液相色谱法分析其单糖组成表明:CYPN-I含有葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖3种单糖;CYPN-II含有甘露糖、鼠李糖、葡萄糖、半乳糖、木糖、阿拉伯糖6种单糖;CYPA-I含有鼠李糖、半乳糖醛酸、半乳糖、木糖4种单糖;CYPA-II含有鼠李糖、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖5种单糖;CYPA-III含有甘露糖、鼠李糖、半乳糖醛酸3种单糖;红外光谱及核磁共振光谱分析可知其多糖特征结构明显,且CYPN-I、CYPN-II为中性多糖,CYPA-I、CYPA-II、CYPA-III为酸性多糖,CYPN-I、CYPA-II含有α型吡喃糖,CYPN-II、CYPA-I、CYPA-III含有β型吡喃糖;比浊法考察五种山药多糖组分对双歧杆菌、乳酸杆菌、大肠杆菌、粪肠球菌体外生长活性影响的结果表明,五种山药多糖对双歧杆菌、乳酸杆菌均具有扶植作用,对大肠杆菌、粪肠球菌均具有抑制作用。结论本实验分别优化出冷水浸提、碱液浸提山药多糖的最佳提取工艺;确定盐酸法为最佳除蛋白方法;冷提、碱提山药多糖经分离纯化后共得到五种山药均一多糖(CYPN-I、CYPN-II、CYPA-I、CYPA-II、CYPA-III);检测并分析出五种山药均一多糖的分子量、单糖组成及其结构;实验证实五种山药多糖对双歧杆菌、乳酸杆菌均具有扶植作用,对大肠杆菌、粪肠球菌均具有抑制作用,且不同浓度山药多糖对各菌的体外生长活性影响不同,为山药多糖对肠道菌群微生态作用的研究奠定了实验基础,为新药开发提供了理论依据。
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