34味中药对牛源金黄色葡萄球菌耐药性和生物被膜的影响

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金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是引起奶牛乳腺炎的主要病原之一,奶牛感染乳腺炎后牛奶品质、产量及所含营养成分均会下降。抗菌药的长期大量使用导致金黄色葡萄球菌的耐药性日益严重,加大了该病的治疗难度和成本,给奶牛产业造成重大经济损失。本试验研究了牛源金黄色葡萄球菌对常用抗菌药的敏感性和其携带的耐药基因及中药对耐药基因和生物被膜形成相关基因的影响,以期为临床治疗提供依据。主要研究内容如下:1.通过平板打孔灌药法、MIC和MBC检测34味中药水煎液对金黄色葡萄球菌抑制作用。结果显示,34味中药中有13味药物对金葡菌有不同程度的抑制作用,其中黄柏、地榆、黄连和五倍子抑菌效果最佳。2.通过K-B纸片扩散法检测金黄色葡萄球菌对常用抗菌药的敏感性,PCR方法检测携带的耐药基因和五倍子、黄连、地榆和黄柏对金黄色葡萄球菌部分耐药基因表达量的影响。结果显示,SA1携带耐药基因mec A和mec B;SA2携带耐药基因mec A和mef A;SA1对庆大霉素、克林霉素、红霉素和苯唑西林等15种药物高度敏感,对头孢他啶中度敏感;SA2对庆大霉素、卡那霉素、环丙沙星和四环素等11种药物高度敏感。五倍子、黄连和地榆对mec A基因的表达有极显著的抑制作用,五倍子、黄连和黄柏对mec B基因的表达有极显著的抑制作用,地榆对mef A基因的表达有显著的抑制作用。3.通过PCR方法检测生物被膜形成相关基因,并研究了五倍子、黄连、地榆和黄柏对生物被膜形成相关基因的抑制作用。结果显示,两株菌均检测出agr A、Sar A、ica A、ica B、clf B、Fnb B、atl E和fib A等8种生物被膜形成相关基因;亚抑菌浓度下的4味中药对金葡菌生物被膜形成相关基因均有不同程度的抑制作用,黄连最佳,对两株菌的8个BF基因均有显著或极显著的抑制作用;黄柏和五倍子次之,除对SA2的atl E基因表达无明显抑制作用,对其余基因均有显著或极显著的抑制作用;地榆最差,除对SA1的Sar A、agr A、atl E、clf B和ica B基因无明显的抑制作用外,对其他基因均有显著或极显著的抑制作用。总结:两株金黄色葡萄球菌均对环丙沙星、四环素、庆大霉素、卡那霉素、诺氟沙星、氧氟沙星、头孢拉定、头孢氨苄、头孢曲松、头孢哌酮、头孢他啶敏感,菌株携带mec A、mec B和mef A耐药基因,黄连、黄柏、五倍子和地榆对耐药基因的表达有不同程度的抑制作用;检测到agr A、Sar A、ica A、ica B、clf B、Fnb B、atl E和fib A等8种生物被膜形成相关基因,4味中药对金葡菌生物被膜形成相关基因均有不同程度的抑制作用。
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