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第一部分FQ-RT-PCR检测EMP mRNA的方法学建立和评价目的：采用Taqman探针技术,建立荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)检测幼红巨噬细胞黏附蛋白(EMP)mRNA的方法并对方法学进行评价。方法：用primer2.0软件设计EMP引物和Taqman探针,优化反应体系,建立EMP mRNA的FQ-RT-PCR方法。用pGEM-TEasy载体与普通PCR扩增所得的EMP cDNA片段进行连接,构建重组质粒作为标准品,并进行方法学评价。结果：本方法检测灵敏度为5拷贝/ml,线性范围为7～7×107拷贝/ml,Ct值与拷贝数之间具有良好的线性关系。批内、批间变异系数分别为2.80～3.15%和3.45-4.50%。扩增产物克隆和测序分析显示扩增片段为EMP特异性序列。结论：成功建立了FQ-RT-PCR检测EMP mRNA的方法,本方法具有敏感、特异、准确、重复性好等特点关键词：幼红巨噬细胞黏附蛋白；mRNA;荧光定量逆转录聚合酶链反应第二部分造血干细胞移植(HSCT)患者骨髓单个核细胞EMP的表达目的：检测幼红巨噬细胞黏附蛋白(EMP)在HSCT患者表达水平的变化,以探讨EMP表达与骨髓红系造血功能的关系。方法：10名健康骨髓捐献者和46名血液病患者HSCT前(进行预处理后)分别设为第1组和第2组；该46名血液病患者在HSCT后的不同时间点(HSC’后第30天、第90天和第180天)分别设为第3组、第4组和第5组。采集各组患者骨髓3 ml,分离单个核细胞。骨髓标本均进行形态学分析,观察骨髓增生程度并计数红系造血岛数量。分别FQ-RT-PCR和Western blot方法检测EMP mRNA和EMP蛋白的表达水平结果：第1组和第2组用Western blot方法未检测到EMP蛋白,但是可用FQ-RT-PCR方法检测到EMP mRNA表达。第3、4、5三组骨髓中均可检测到EMPmRNA和EMP蛋白,其表达水平和骨髓平均红系造血岛数量均明显高于两个对照组。结论：骨髓红系增生旺盛,造血岛数量增加时EMP表达水平可明显增加,EMP在一定程度上可反映骨髓红细胞系统的造血状态。