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研究背景术后肠梗阻是腹部外科手术术后不可避免的并发症,也可见于非腹部手术中,临床表现为腹胀、腹痛、恶心、呕吐,肛门排气排便延迟和不能耐受进食,肠鸣音消失等,推迟进食时间,延长住院天数,增加医疗花费。研究发现术后肠梗阻与炎症反应密切相关。有研究利用术后肠梗阻动物疾病模型和某一基因敲除动物相结合来研究该动物该基因的缺失对术后肠梗阻的影响,这极大地增强了人们对于术后肠梗阻相关机制研究兴趣,也为进一步探索机体对保护肠道功能的分子机理研究提供了一条新思路。类固醇受体辅助激活因子-3(Steroid receptor coactivator 3,SRC-3)最早是在寻找与乳腺癌有关的扩增基因时被发现,近年利用SRC-3基因敲除小鼠研究发现,细菌脂多糖LPS能够诱导SRC-3基因敲除型小鼠产生更高表达水平的炎症因子,并已经通过分子生物学实验证明SRC-3可以抑制TNF-a、IL-1b等促炎因子的翻译。前期实验我们已经成功构建了小鼠术后肠梗阻模型和应用WesternBlotting技术检测到手术处理过的野生型小鼠肠肌层中SRC-3的表达上调,提示SRC-3在术后肠梗阻中起保护作用。在本研究中,我们利用SRC-3敲除小鼠与术后肠梗阻模型结合来进一步探索SRC-3是在小鼠术后肠梗阻中是如何起保护作用的。目的探讨SRC-3抑制小鼠术后肠梗阻肠壁肌层炎症反应的作用。研究方法1.按实验动物饲养要求获得SPF级BALB/c雌性敲除基因型和野生型(SRC-3-/-、SRC-3+/+)(KO、WT)小鼠至10-12周龄,体重为18-23克,通过基因鉴定选择符合实验条件的小鼠。2.在无菌条件下通过规范的腹部外科手术方式切开腹腔,实验组用湿棉签从十二指肠末端涂擦小肠至回盲部,动作轻柔,3次共8-10分钟,建立术后肠梗阻模型,通过酚红验证SRC-3-/-小鼠POI的建立。3.通过ELISA、Real Time-PCR实验方法检检测SRC-3干扰术后肠梗阻肠壁肌层各种细胞因子的变化。结果1.术后24h,实验组SRC-3-/-、SRC-3+/+小鼠的酚红主要分布在sto-s5段,对照组SRC-3-/-、SRC-3+/+小鼠的酚红主要分布在s7-cm段,通过计算酚红分布的几何中心分析得出:对照组中两者无明显差别(P=0.84);而实验组SRC-3-/-小鼠酚红分布几何中值心明显低于SRC-3+/+小鼠酚红分布几何中心值(P=0.017),外科操纵后SRC-3-/-小鼠比SRC-3+/+小鼠产生更严重的胃肠动力障碍,提示SRC-3在术后肠梗阻中起到保护作用。2.Real Time-PCR方法检测发现细胞因子CCL2(P=0.039)、COX-2(P=0.023)、IL-1β(P=0.046)、HO-1(P=0.043)、IFN-γ(P=0.034)在基因敲除小鼠肠壁肌层中的表达明显比在野生型小鼠肠壁肌层中的表达更高,有统计学差异;而CXCL9(P=0.21)、IL-17A(P=0.80)分别在敲除基因型小鼠、野生型小鼠实验组和对照组中比较无统计学差异;无论是对照组还是实验组中的术后24小时SRC-3敲除小鼠IFN-γ表达水平均较野生型表达高,提示SRC-3与IFN-γ可能存在某种联系,并且SRC-3可以抑制肠壁肌层中IFN-γ的表达。3.ELISA方法检测发现促炎因子IL-6(P=0.031)、TNF-α(P=0.036)、IL-1β(P=0.028)和趋化因子CCL2(P=0.025)在KO小鼠肠壁肌层中的表达明显比在WT小鼠肠壁肌层中的表达增高。结论1.鉴定和筛选出符合实验的小鼠,成功构建术后肠梗阻动物模型。2.小鼠经腹部外科手术处理24小时后的SRC-3敲除基因型小鼠肠肌层的细胞因子在m RNA和蛋白水平表达均明显较野生型小鼠高,提示SRC-3在术后肠梗阻中可以抑制肠壁肌层炎症因子的表达,其在术后肠梗阻的炎症反应中起到了保护机体的作用。