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屎肠球菌(Enterococcus faecium)是一种革兰阳性球菌,广泛存在于环境及人和动物的胃肠道中,同时也是医院内感染的重要病原菌之一,可引起尿路感染、皮肤软组织感染、腹腔感染、败血症、心内膜炎和脑膜炎等。近年来,从住院病人、健康人、动物(猪、牛、狗、鸡、猫等)以及环境和食品中分离到的耐药甚至多重耐药的屎肠球菌的报道很多,可是关于野生动物携带屎肠球菌的研究还较少。本研究对青海省玉树地区牦牛和旱獭携带的屎肠球菌进行了分离鉴定和分析。使用K-F链球菌选择培养基和哥伦比亚血平板,使用生物梅里埃API20Strep生化鉴定系统和16S rDNA序列及ddl基因序列鉴定方法,我们从320份牦牛粪便标本和200份旱獭肠道内容物标本分别分离到33株(10.3%)和32株(16%)屎肠球菌,合计65株。并对65株屎肠球菌进行了药敏实验和耐药相关基因检测、毒力基因检测、脉冲场凝胶电泳(Pulsed-Field Gel Electrophoresis,PFGE)以及多位点序列分型分析(Multi-Locus Sequencing Typing,MLST)。33株牦牛分离株中,有19株菌耐药(57.6%),包括4株多重耐药菌株和15株单耐药菌株;这19株耐药屎肠球菌对利福平、红霉素、青霉素G、氨苄西林、高浓度庆大霉素、四环素、强力霉素、环丙沙星、左氧氟沙星及磷霉素10种抗生素不同程度耐药,耐药率分别为 48.5% (16/33)、9.1% (3/33)、15.2% (5/33)、6.1% (2/33)、6.1% (2/33)、12.1% (4/33)、12.1% (4/33)、6.1% (2/33)、6.1% (2/33)、6.1%(2/33)。32株旱獭分离株中,有13株菌耐药(40.6%),包括10株(31.3%)对利福平耐药的菌株和3株(9.4%)对红霉素耐药的菌株。所有菌株对万古霉素、替拉考宁和氯霉素均敏感。检测到的耐药相关基因包括ermB、tetM、tetL、aac(6’)-Ie-aph(2’)。检测阴性的耐药基因包括ermA ermC、mef、ereA、ereA、mphA、tetW、tetQ、tetS、、fosA、fosB、fosC、vanA、vanB 等。对屎肠球菌氨苄西林耐药相关基因pbp5的检测,发现了 3个新的氨苄西林耐药相关氨基酸变异位点:408位谷氨酰胺突变为组氨酸、476位丙氨酸突变为丝氨酸及477位亮氨酸突变为甲硫氨酸。对喹诺酮类抗生素耐药相关基因gyrA和parC扩增测序,发现2株喹诺酮类抗生素耐药菌株的gyrA和parC基因均有突变。对65株屎肠球菌毒力基因检测结果显示,asa1(aggregation substance)阳性率最高,为7.7%,hyl (hyalronidase)阳性率次之,为 3.1%,acm (collagen-binding-adhesin)阳性率为 1.5%,esp(enterococcal surface protein )、cylA (cytolysin )和gelE( gelatinase )均未检测到。细菌染色体DNA酶切片段的PFGE分析发现,65株屎肠球菌呈现58种PFGE带型,可分为A-H8个聚类群,耐药菌株主要分布在A、C、F、G4个聚类群中。MLST分型方法可将65株屎肠球菌共分为32个序列型(Sequence Type, ST),包括22个新的ST型。10个已经报道的ST型中,有2个ST型(ST18,ST262)属于克隆复合体17 (Clonal Complex 17, CC17)。这两个ST型的菌株对9种抗生素耐药。本研究首次报道青藏高原牦牛和旱獭携带屎肠球菌,其中一部分菌株具有抗生素耐药性,携带抗生素耐药性基因和毒力基因,可能具有一定的公共卫生意义。