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绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovipneumoniae)主要通过呼吸道来引起羊的传染性胸膜肺炎,临床症状为大叶性肺炎,支原体分布广泛,受损害的范围遍布多个国家和地区。新疆、内蒙古、山东等一些地区是发展养羊业的主要地区,最近几年,绵羊肺炎支原体病的流行趋势和范围逐渐扩大,给养羊业带来了巨大的冲击。我们要采用预防为主、治疗为辅的原则,防控该病的手段还是建立快速的检测方法。就现在来说,我国针对绵羊肺炎支原体这部分依旧很薄弱,所以,本次研究对分离出来的绵羊肺炎支原体菌株进行了鉴定,然后将分离纯化后的菌株进行后续试验。为建立简便快速的检测方法,本试验建立间接ELISA抗体检测方法以绵羊肺炎支原体膜蛋白P130-3为包被抗原。根据基因功能预测注释,绵羊肺炎支原体(Mo)P130-3蛋白显示编码大小约为130.5 ku,本试验以绵羊肺炎支原体的全基因组为模板,利用PCR技术扩增P130-3的基因片段,选取P130-3主要抗原域P130-3(693bp),构建P130-3蛋白主要抗原域原核表达载体PET32a-P130-3,并将载体转化到BL21中,诱导表达条件为0.8mMol/L IPTG和37℃,经超声波破碎、离心、纯化后进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。本试验建立了基于P130-3的间接ELISA检测方法,确定优化后的间接ELISA条件为:抗原包被浓度0.5μg/mL,4℃包被过夜;封闭液为1%BSA,37℃封闭1 h;一抗血清最佳浓度为1:100,最佳反应条件为37℃、1 h;二抗为驴抗绵羊辣根过氧化酶标记抗体酶标二抗最佳工作浓度为1:6000,最佳反应时间为37℃、1 h。结果表明:表达的P130-3蛋白经鉴定大小为43 ku,与预期值相符。并确定了建立的间接ELISA方法具有良好的敏感性、特异性以及重复性。使用30份试剂盒鉴定为阴性血清进行间接ELISA检测,确定阴阳判定临界值0.238。通过150份临床样品的检测对全菌蛋白和本试验所建立的间接ELISA方法进行符合率的检测,试验结果表明两者符合率达90.67%。综上所述,本试验所建立的间接ELISA方法简便、快速,相对于其他检测方法价格低廉,可以用来诊断绵羊肺炎支原体病和流行病学调查。