从传统药用植物及一些特殊环境植物的内生真菌次生代谢产物中寻找新型活性物质,是内生真菌研究的主流之一。H-18菌株是西北农林科技大学无公害农药研究服务中心从优良抑菌植物大花金挖耳中分离得到内生真菌,经初步抑菌活性测定,有较好的抑菌活性,值得进一步研究。本文以H-18内生真菌为出发菌株,应用形态分类学和分子生物学方法鉴定了其分类地位;研究了其代谢产物的抑菌活性,并对目标活性物质进行分离和结构解析。通过试验结果的分析和讨论,取得了以下结论:1采用形态学方法对H-18菌株进行分类和鉴定,H-18菌株在CSA培养基的培养性状为:菌落中间隆起,气生菌丝发达,菌丝表面呈暗红色,并附有黄棕色;显微镜下观察菌丝分支,有隔,无色透明;分生孢子有大小两种,大型分生孢子着生在分生孢子梗顶端,成镰刀状,纺锤形,微弯曲,两端尖,具有3-5个横隔;小型分生孢子多数单细胞,卵型。可初步判断H-18菌株属于镰孢属(Fusarium sp.)真菌。2对H-18菌株进行分子生物学鉴定,利用引物ITS1和ITS4扩增得到了PCR产物,对得到的ITS-5. 8S rDNA片段进行连接转化和酶切验证后侧序,测序表明ITS-5. 8S rDNA区域的目的片段大小为563bp,对H-18菌株的ITS-5.8S rDNA区域核苷序列在GenBank中的进行比对,该菌株和同色镰孢菌的同源性达到99.6%,根据系统发育树和遗传距离分析,初步鉴定H-18菌株为同色镰孢菌。3对H-18菌株菌丝粗提物进行了抑菌活性测定。结果表明H-18菌株菌丝提取物中丙酮提取物有明显的抑菌活性。离体试验结果表明,H-18菌株菌丝体的丙酮提取物在0.5mg/mL的浓度下对玉米大斑病菌、番茄灰霉病菌和辣椒疫霉病菌的菌丝生长抑制率均大于80 %;组织法和盆栽试验结果表明,H-18菌株菌丝体丙酮提取物在2mg/mL浓度下对番茄灰霉病菌和辣椒疫霉病的保护效果和治疗效果均在50 %以上。4在活性追踪指导下对H-18菌株丙酮提取物的抑菌活性成分进行分离。采用常压柱层析和薄层层析等技术,分离得到2个活性单体化合物,通过对该化合物质谱、红外光谱、紫外光谱、核磁共振谱的初步分析,推测化合物R1为β-谷甾醇,化合物R2可能为一种胺酯类化合物,其结构需经进一步鉴定。采用孢子萌发法测定了该两化合物对番茄灰霉孢子的抑制作用,化合物R1无明显的抑制作用,化合物R2抑制番茄灰霉孢子萌发的EC50为4.077mg/L。