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海参溶菌酶属于i型溶菌酶,不仅对革兰氏阳性菌具有抑菌作用,而且对革兰氏阴性菌也有作用。研究发现,海参溶菌酶的N端区域编码了糖苷酶活性,而C端多肽具有非酶抑菌活性。因此,研究海参溶菌酶C端多肽的表达、分析多肽性质,将为研究海参溶菌酶的抑菌作用及其非酶分子机制奠定基础。本文主要研究重组海参溶菌酶C端多肽(rSjLys-C)的表达纯化、抑菌活性及其酶活性质。实验首先通过构建载体,得到高效表达可溶多肽的工程菌;通过镍离子亲和层析和Sephadex G-25纯化rSjLys-C,利用肠激酶酶切rSjLys-C;然后通过抑菌试验测定最小抑菌浓度以及抑菌率;最后,通过测定异构肽酶酶学特性及动力学参数,研究rSjLys-C的非酶活性分子作用机制。实验结果表明,rSjLys-C在工程菌种高效表达并以可溶形式存在,通过镍离子亲和层析成功纯化rSjLys-C,收率为68.1%。肠激酶将rSjLys-C切为两段,分别为融合标签及海参溶菌酶C端多肽(SjLys-C),分子量分别约为9 kDa和17 kDa。抑菌实验表明,rSjLys-C对革兰氏阳性菌/阴性菌均有抑菌活性,同时,热处理后rSjLys-C的抑菌能力明显提高。其中,rSjLys-C对金黄色葡萄球菌的最小抑菌浓度为3.14×10-7mol/L,抑菌率为91.86%;对副溶血弧菌的最小抑菌浓度为1.57×10-7 mol/L,抑菌率为87.67%。rSjLys-C具有异构肽酶活性,其最适条件为pH 7.0,37℃,其特征常数Km值为0.28mmol/L,kcat值为0.012314 s-1,kcat/Km值为44(s·mol/L)-1。实验结果表明,相对于已知的两种i型溶菌酶,Tapesjaponicalysozyme 和 Destabilase lysozyme,rSjLys-C 对底物 L-γ-Glu-pNA 催化效率更高。上述实验结果表明,rSjLys-C具有可溶性、良好的抑菌活性以及异构肽酶活性,将在水产养殖、饲料添加、防腐保鲜、医药保健等行业得到广泛应用。