朊病毒（Prion）可引起的人和动物的传染性海绵状脑病（Transmissible SpongiformEncephalopathies,TSE_s）。该致病因子具有与普通病原微生物不同的理化和生物学特性，至今其致病机理尚不完全明确。本研究利用基因克隆表达和生物信息学技术，结合病理组织学及实时荧光定量RT-PCR（Real-time RT-PCR）等方法，在对PrP^c功能表位分析的基础上，对其主要结构蛋白合成肽的免疫学特性进行了分析，并对PrP^c重组蛋白脑内接种金黄地鼠的生物学特性进行了探索，为今后进一步研究Prion的致病机理和检测技术奠定了基础，研究内容如下： 1．分别成功克隆了奶牛、牦牛、大熊猫、恒河猴、孔雀及珍珠鸡的PrP^c基因，运用分子生物学软件对其和相关种属PrP^c基因及氨基酸序列进行了序列比较、遗传进化和同源性分析，对PrP^c结构蛋白的功能表位及二级结构进行了预测，获得了有关种属间PrP^c基因结构多态性及功能表位生物学信息，为PRNP基因多态性与朊病毒病的连锁关系研究提供了基础数据。 2．利用Goldenkey分子生物学软件分析确定了奶牛PrP^c的抗原功能表位，化学合成特定序列结构蛋白多肽，经鉴定后按照一定的分子比与载体蛋白匙孔嘁血蓝蛋白偶联，经检测后制备牛PrP^c多肽兔多抗，并进行了免疫学特性检测。结果表明，所制备的特定表位结构蛋白多肽抗体经ELISA方法测定抗体效价达到1：10⁸，经Western blotting试验检测，能够与PrP^c重组结构蛋白和纯化的牛PrP^c结合。提示该结构蛋白多肽抗体具有良好的免疫学特性，有望用于TSE检测试剂的研制。 3．采用原核表达系统对牛PrP^c结构蛋白进行了成功表达，并利用结构蛋白多肽抗体进行了鉴定。结果表明：在37℃、OD为0.8时经IPTG（1.0mmol／L）诱导表达3h条件下，重组PrP^c蛋白的表达量最高。经Western blotting方法检测，表达蛋白与多肽抗体反应性良好。结果提示：本研究成功制备了牛PrP^c重组结构蛋白，该蛋白有望进一步用作Prion结构生物学的研究材料。 4．为了弄清PrP^c重组结构蛋白的生物致病性及其对prp^c基因表达的影响等生物学特性，进而为研究PrP^c转化为PrP^sc的选择压力条件提供生物学检测方法奠定基础。对试验组6只金黄地鼠脑内注射纯化后的PrP^c重组结构蛋白（10μg/μl，3μl），对照组2只金黄地鼠用磷酸盐缓冲液（PBS）同法处理，临床观察记录；102天后将实验动物经眼球静脉放血处死，分别取小脑、脑干（Obex部位）、部分大脑经甲醛固定、制作石蜡切片、H.E.染色，光镜下进行组织病理学观察；取另一部分大脑提取总RNA利用实时荧光定量RT-PCR方法检测不同处理组金黄地鼠PrP^c表达差异。结果表明：金黄地鼠脑内注射102天内，未见异常临床症状，试验组与对照组无明显差异；未见异常组织病理学变化；试验组和对照组金黄地鼠脑组织PrP^c基因表达无显著差异。结果提示：通过PrP^c重组蛋白在检测时间内未能引起地鼠脑组织海绵状病理变化，未能引起PrP^cmRNA表达水平改变，为进一步研究PrP^c重组蛋白结构生物学提供了基础数据。