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目的:本研究旨在应用RNA干扰(RNA interference, RNAi)技术,构建卡氏肺孢子(Pneumocystis carinii,PC)主要表面糖蛋白(Major surface glycoprotein,MSG)表达调控基因上游保守序列(Upstream conserved sequence,UCS)的小干扰RNA(short interfering RNA,siRNA)表达载体,并将其转染到PC中有效表达后,研究其对PC的抑制作用。方法:设计并人工合成针对PC MSG-UCS基因的短发夹状(Short hairpin RNA,shRNA)序列并定向克隆到siRNA表达载体pTZU6+1上,采用双酶切与测序法进行鉴定;将构建成功的主要表面糖蛋白UCS基因siRNA表达载体pPC-UCS体外转染到PC中,用RT-PCR检测转染48小时后UCS基因的表达,在扫描电镜下观察PC的超微结构变化;将表达载体pPC-UCS用水动力法注射到PCP大鼠体内,48小时后进行以下检查:大鼠肺印片记数包囊、观察肺组织病理改变、电镜检测PC的超微结构改变。结果:酶切和测序鉴定得到的产物与预期目的基因一致;体外转染pPC-UCS的PC中UCSmRNA表达水平降低,与对照组相比,结果具有显著性差异,UCSmRNA的抑制率为77.47%;转染pPC-UCS48小时后,在扫描电镜中观察PC,可见PC水肿胀大,微绒毛脱落,表膜破裂,出现破损。体内转染pPC-UCS 48h后,包囊减少率为67.88%,与对照组相比,结果具有显著性差异;大鼠肺泡炎减轻,与对照组相比,结果具有显著性差异;扫描电镜观察可见PC水肿胀大,微绒毛脱落,表膜破裂,出现破损。结论:成功构建和鉴定卡氏肺孢子主要表面糖蛋白UCS基因的siRNA表达载体;所构建的PC MSG-UCS siRNA表达质粒能在体外有效抑制PC中UCS基因的表达,导致PC细胞壁的破坏并杀灭PC;所构建的PC MSG-UCS siRNA表达质粒能在体内有效抑制PC增长并杀灭PC,减轻肺部炎症。