金针菇(Flammulina velutipes)在东南亚乃至全世界范围内都是一种极其重要的食药用真菌。它以其独特的口感和良好的营养、药用价值在东亚尤其是中日韩等国家赢得了众多消费者的喜爱。但由于金针菇中遗传转化体系的缺乏,限制了金针菇的生物学研究进展。本研究首次将脂质体转化方法成功引入到金针菇中,获得了 一个简单有效的金针菇遗传转化体系。在金针菇中,脂质体转化法的转化效率能够高达60-80个转化子/104个原生质体,而电击转化法的转化效率为10-20个转化子/104个原生质体,农杆菌转化法的转化效率仅为5-10个转化子/104个原生质体;脂质体介导的金针菇遗传转化体系5-6天就能观察到转化子,而电击转化方法要到10天时才能发现转化子,农杆菌转化方法则需要两周。相比较而言,脂质体转化方法所需培养时间更短,转化效率更高。为了研究漆酶基因在金针菇生长发育中的作用,本研究使用建立的脂质体转化体系筛选得到漆酶基因的沉默菌株和过表达菌株。在金针菇中共比对到9条漆酶序列,应用RT-PCR检测金针菇中的漆酶基因表达量,结果表明:Lac1,Lac2,Lac3,Lac4的基因表达量较高,而Lac5,Lac6,Lac7,Lac8,Lac9的表达量相对比较低。通过比对这9条漆酶序列的相似性,发现Lac2,Lac3,Lac4之间两两相似性最高(Lac2和Lac3的相似度达到33.72%,Lac3和Lac4的相似度达到26.08%,Lac2和Lac4的相似度达到30.03%),且Lac2的基因表达量最高,据此针对Lac2挑选相似度高的片段设计沉默片段,构建了沉默载体,之后又构建了 Lac2的过表达载体。然后通过脂质体转化的方法将构建好的载体转入金针菇中,筛选得到对Lac2沉默效率达到百分之七十五,对Lac3和Lac4的沉默效率达到百分之五十左右的沉默转化子,以及过表达漆酶基因1.6倍左右的过表达Lac2转化子。为了进一步研究漆酶沉默和过表达转化子对表型的影响,我们检测了这些转化子的漆酶酶活、菌丝生长速度和生物量、吃料速度以及金针菇原基情况。结果表明:沉默转化子的漆酶酶活、菌丝生物量低于野生型,吃料速度以及原基发生速度也比野生型慢;过表达转化子的漆酶酶活、菌丝生物量高于野生型,吃料速度以及原基萌发也比野生型快。综合这些结果表明:提高漆酶基因转录水平可以提高漆酶活性、菌丝生物量,加快菌丝的吃料速度和促进原基的萌发。综上所述,本研究首次在金针菇中建立了高效的脂质体遗传转化体系,为后续金针菇功能基因的研究奠定了基础;之后研究了漆酶基因在金针菇生长发育过程中的作用,将进一步揭示金针菇子实体形成过程中漆酶基因的作用,并为深入研究漆酶基因提供了理论基础。