【摘 要】
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运用林木菌根学、菌物学、分子生物学及石蜡制片技术等试验方法,对2株红皮云杉高效外生菌根菌的培养特性、生理学习性、分类地位的分子生物学确认以及侵染红皮云杉微观机制进
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运用林木菌根学、菌物学、分子生物学及石蜡制片技术等试验方法,对2株红皮云杉高效外生菌根菌的培养特性、生理学习性、分类地位的分子生物学确认以及侵染红皮云杉微观机制进行了系统研究,研究结果表明:菌株025菌丝生长最适温度为25℃,最适碳源为葡萄糖,最适pH值为6.5~7.5;菌株035菌丝生长最适温度为20℃,最适碳源为蔗糖,最适pH值为7.0;2菌株均在无氮下生长最佳,供试氮源对2菌株的菌丝生长均有一定的抑制作用。菌株025生长较菌株035快。首次利用通用引物ITS1与ITS4从高效菌株025和035中扩增出rDNA ITS序列,2个菌株ITS序列长分别为663bp和662bp,GenBank登陆号分别为EF531717和EF531716。通过比对,初步确定菌株025为Cortinarius sp.,与粘柄丝膜菌[Ccollinitus(AY083181)]相似性为95%;菌株035为Suillus sp.,与点柄乳牛肝菌[S.granulatus(AJ272409)]相似性为94%。不同外生菌根菌对云杉苗木根部侵染的部位、侵染过程不同,云杉苗木根部皮层细胞的反应亦不同。菌株035首先是菌套内部菌丝作用于根尖组织表皮,使其逐渐消失;通过已消失的表皮孔隙进入到皮层组织内部,与皮层组织细胞作用,依附,蔓延,形成哈蒂氏网,逐渐形成菌根,根尖组织细胞颜色变深,细胞壁增厚。菌株025则是菌套内部菌丝依附在表皮上,菌丝接触皮孔和表皮缝隙,由皮孔和表皮缝隙侵入皮层细胞,在侵入的同时,皮孔和表皮缝隙变形逐渐消失,在菌丝的作用下,表皮才逐渐消失,菌丝进入皮层细胞后,蔓延方式与菌株035相似。供试外生菌根菌株在植物根部形成菌丝套,菌丝体深入红皮云杉根部皮层细胞间形成哈蒂氏网,但不进入到根部内皮层组织细胞中。不同外生菌根菌侵染苗木后,形成菌根的时间长短不同。人工培养条件下生长快的菌株,形成菌根的时间短。菌株025侵染红皮云杉营养根形成菌根速度远远大于菌株035,苗木接种菌株025后,约21d即可形成菌根;而菌株035侵染速度较慢,接种一个多月后才与红皮云杉根系形成菌根。不同外生菌根菌在红皮云杉根尖形成的菌套厚度与苗木生长有一定的正相关性。
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