拮抗菌S76田间防控赤霉病及转抗赤霉病基因小麦研究

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小麦赤霉病严重影响生产和食品安全,而喷施化学农药防治小麦赤霉病易引起环境污染等问题。本研究拟评估拮抗菌S76在田间防控小麦赤霉病的效果,创建具有不同抗赤霉病相关基因的小麦材料,为发展绿色高效小麦赤霉病防控技术、培育抗赤霉病小麦新品种提供材料与依据。主要研究结果如下:1、拮抗菌S76田间防控小麦赤霉病分析。解淀粉芽孢杆菌S76在培养基上对小麦赤霉病菌具有显著拮抗作用。田间防控赤霉病小区试验结果显示,S76可湿性粉剂对郑麦9023(Z9023)和鄂麦580(E580)两个品种的防效分别达24%和14%。当S76与化学杀菌剂多菌灵(1/2用量)复配使用,赤霉病防效可达到甚至高于多菌灵全用量的防效;在Z9023中防效可达52%,小麦百粒重也显著高于多菌灵;在E580中小麦百粒重增加25%,是多菌灵处理的1.9倍。2、转抗赤霉病基因小麦材料的筛选与鉴定。采用基因枪介导法,将多个基因的最小表达框转化小麦品种扬麦158(Y158)和扬麦11(Y11),筛选获得转4种不同类型基因的转基因株系共19个:(1)转细菌脱毒基因小麦:将细菌脱毒基因AKR18A1和AKR13B2转化小麦品种Y158,获得10个T0代YT株系。RT-PCR和Western blot检测发现,T2、T3代PCR阳性植株中脱毒基因在转录和翻译水平均有较高的表达。T2代转基因株系的苗期DON毒素耐受性显著性提高;HPLC检测表明,培养转基因株系的培养基中DON毒素含量显著降低17%-27%。T2代转基因株系在温室经单花接种后的赤霉病抗性比未转化受体品种显著提高了29%-44%;(2)转不同靶基因RNAi片段小麦:以禾谷镰刀菌生长和致病所需关键基因为靶标,设计RNA干扰构建体,转化小麦品种Y158和Y11,获得4个含有不同RNAi片段的株系;其中,转Ubi N-AS5-t RNA-AS2c-Nos的1个Y158株系(YZ1);转Ubi N-AS-MyoⅡ-Chs3bchs7-Gls-MyoⅠ-Nos的2个Y158株系(YCGE);转Lem1-ASChs3b-Chs7-Gls-Pkc-Tri5-OCS的1个Y11株系(YWTA)。T2、T3代转基因株系温室单花接种时,YZ1、YCGE1和YWTA株系的赤霉病抗性比未转化受体品种分别提高47%、60%和54%;(3)转不同抗菌肽基因小麦:将多种可以抑制镰刀菌生长的抗菌肽基因,以不同组合转化小麦品种Y158和Y11,共获得2个株系;转抗菌肽基因组合APM和p AH5获得1个Y11株系(YAH5),转抗菌肽基因组合APM获得1个Y158株系(YAPM)。T2转基因株系温室单花接种后,YAH5-1株系的赤霉病抗性比非转化受体品种显著提高了60%;(4)共转化RNAi片段和抗体融合蛋白小麦:将RNA干扰构建体和抗体融合蛋白,共转化小麦品种Y158,共获得3个同时含有RNAi片段Ubi N-AS5-t RNA-AS2c-Nos和抗体融合蛋白Lem2-Ech42-D2的株系(YZ3)。T2和T3代YZ3-9株系温室单花接种的赤霉病抗性,比未转化受体对照分别显著提高了33%和66%。
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