【摘 要】
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为了较全面地研究拟南芥中存在的42种钙依赖性蛋白激酶(34种CPKs和8种CRKs)所分别具有的可能功能,首先必须建立有效的检测这些蛋白激酶表达及其变化的方法.该论文工作根据拟
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为了较全面地研究拟南芥中存在的42种钙依赖性蛋白激酶(34种CPKs和8种CRKs)所分别具有的可能功能,首先必须建立有效的检测这些蛋白激酶表达及其变化的方法.该论文工作根据拟南芥基因组数据库所给出的34个CPK和8个CRK序列,分别尝试建立了42种钙依赖性蛋白激酶的cDNA阵列和RT-PCR检测方法.对cDNA阵列方法的杂交特异性分析表明,当被检序列与探针序列的同源性达到82％时,其杂交信号强度约是探针与其自身杂交信号强度的30％.在42种被检序列中,仅有两个序列的同源性在80％以上,其余绝大多数序列之间的同源性都在70％以下或更低.结果表明,该工作建立的cDNA阵列方法有较好的特异性,能够满足实验的要求.同时,采用RT-PCR方法对拟南芥CDPK基因家族在正常或渗透胁迫条件下的表达进行了定性分析,初步观测到拟南芥植株中有超过三分之二的CPK基因和CRK基因存在一定程度的表达.这说明RT-PCR方法适用于研究拟南芥CDPK基因家族的低丰度表达.这些方法的摸索和尝试为进一步探讨CDPK在植物细胞信号转导中的作用机制奠定了基础.
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