人呼吸链相关基因的基因芯片制备及血清应答分析

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ATP是细胞的主要能量提供形式,它主要由线粒体呼吸链产生。因此,控制呼吸链蛋白的表达必然对生物体的生命活动产生影响。血清是细胞生长必需的物质,血清饥饿时细胞的生长受到抑制。血清对细胞增殖的作用影响与线粒体呼吸链蛋白之间的关系至今报道甚少。本研究旨在探讨在血清饥饿条件下线粒体氧化磷酸化相关基因的表达变化,从而探讨线粒体活性与细胞增殖的关系。 呼吸链蛋白是由核基因组和线粒体基因组共同编码的。线粒体上所编码的13个蛋白全部为呼吸链蛋白,这些蛋白的表达又受到核基因组编码的线粒体转录调控因子的控制。因此,线粒体呼吸链活性受三部分基因的控制,核基因组编码基因、线粒体编码基因和线粒体基因表达的调控基因。 为了研究线粒体呼吸链蛋白的表达在血清饥饿条件下的变化,本研究克隆了86个呼吸链复合物相关基因及6个线粒体转录调控基因,制各成20×20的基因芯片。经过不断的条件摸索和试验,优化了表达谱基因芯片制备和应用的方法步骤,以及上样量、点样浓度和紫外交联时间等相关的参数。 对血清饥饿培养不同时段的细胞以及正常培养的同代细胞抽提总RNA、逆转录合成以Cy5-dUTP和Cy3-dUTP标记的cDNA、与微阵列芯片杂交、芯片扫描及数据采集和分析来比较血清饥饿过程中呼吸链相关基因的表达变化,发现线粒体转录终止因子mTERFL、线粒体RNA聚合酶以及核基因组编码的ATP5B、UQCRC2等六个呼吸链基因对血清敏感,这些基因可能是调控氧化呼吸链活性的一些关键基因。这一研究结果同时表明,线粒体活性与细胞生长有密切的关系。
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