肝素是一种高度硫酸化的氨基聚糖,呈酸性,临床上被广泛用作抗凝血剂。硫酸乙酰肝素的硫酸化程度较肝素低,也有抗凝血活性,但弱于肝素的作用。Escherichia coli K5的荚膜heparosan的多糖链由葡萄糖酸及乙酰葡萄糖胺的重复二糖单位组成,其糖链骨架结构与肝素及硫酸乙酰肝素的糖链相似,heparosan可以经酶化学修饰制备肝素或硫酸乙酰肝素。因而,Escherichia coli K5可用于大量制备heparosan,以满足人工非动物源肝素或硫酸乙酰肝素生产所需。为了实现大量发酵制备纯度较高的E.coli K5荚膜多糖,首先考察了发酵培养基组成对E.coli K5产荚膜多糖的影响,发现培养基中添加葡萄糖对E.coli K5产荚膜多糖有利,有机氮源对E.coli K5发酵产荚膜多糖也有一定的影响。在确定较佳发酵培养基组成基础上,考察了几种流加补料策略对E.coli K5在5L发酵罐中发酵的作用效果,发现溶解氧水平是影响E.coli K5在5 L发酵罐中生长和产heparosan的重要因素,用于pH控制的NH₃·H₂O也会对菌体的生长产生影响。本文考察了分离纯化工艺及条件对获得多糖样品纯度的影响,比较确定了较经济,适用于E.coli K5荚膜多糖初级分离的硫酸铵沉淀法。同时对waaR基因（编码α-1,2-糖基转移酶,该基因的缺失会影响荚膜多糖的稳定性）敲除突变株E.coli K5ΔwaaR发酵制备heparosan样品及其分子量分布情况进行分析。凝胶渗透色谱分析及多糖凝胶电泳结果均显示突变株E.coli K5?waaR及野生菌株E.coli K5的荚膜多糖分子量的差异,突变株的heparosan平均分子量较低,提示了突变株发酵制备的heparosan可用于制备低分子量肝素。