蓝莓间座壳溃疡病菌Diaporthe spp.鉴定及分子检测研究

来源 :沈阳农业大学 | 被引量 : 3次 | 上传用户:jueduizhi
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蓝莓是一种新兴的小浆果类树种,蓝莓果实细腻,酸甜可口,具有特别的香气,是健康的鲜食浆果之一。蓝莓不仅好吃,还具有非常丰富的营养价值,蓝莓中除了含有糖类等物质,还含有黄酮、酚类物质,花青素等特殊成分;有研究表明蓝莓还具有预防动脉粥样硬化、保护心脑血管、清除人体自由基,延缓衰老等保健功能。近年来蓝莓的销售及推广逐渐增多,蓝莓也越来越受到人们的欢迎。间座壳溃疡病是危害蓝莓的一种严重病害之一,病菌可从茎伤口、嫩枝及芽眼侵入,造成蓝莓减产,严重时可使整株蓝莓枯死。本文对我国部分蓝莓主产区的蓝莓茎溃疡病样进行采集,对蓝莓病样进行分离纯化及致病性测定,并且采取形态学与分子系统发育学结合的方法对病原菌进行鉴定;同时设计PCR特异性引物,用于病原真菌的分子检测;选取代表菌对我国主要栽培的10个蓝莓品种进行致病性测定以及抗性评价,为病害的防治打下基础。主要结果如下:1.2014~2016年在我国多个蓝莓主产区进行蓝莓病样的采集,采集地分别位于我国福建省龙岩市;江西省上饶市;浙江省新昌市;四川省成都市;辽宁省大连市、丹东市;黑龙江省伊春市,6个省7个市的蓝莓种植园。共分离纯化出52株具有致病性的病原菌,对病原菌进行致病力分级,其中22株菌具有强致病性,8株菌具有较强致病性,15株菌具有中等致病性,7株菌具有弱致病性。2.对52株病原菌采取ITS与EF1-α联合基因分别采用贝叶斯法(BI)和最大简约法(MP)进行系统发育分析,并结合形态学进行鉴定。52株病原菌中至少存在5种间座壳溃疡病菌,其中,有44株2种病原菌可确定其种类,其他的病原菌由于缺乏相关模式菌株信息暂时无法定种。经鉴定Diaporthephaseolorum为蓝莓间座壳病病原之一,该种群菌株包括龙岩市的1株菌、伊春市的1株菌、丹东市的2株菌以及大连市的3株菌,该种菌具有中等弱致病性,且主要分离自我国东北地区,本研究系国内外首次报道D.phaseolorum危害蓝莓,造成蓝莓茎溃疡病;Dhongkongens.为另一种蓝莓间座壳溃疡病的病原菌,包括上江西饶市1株菌、浙江新昌市6株菌以及福建龙岩市30株菌,共37株病原菌定种为D.hongkongensis,该种病原菌致病性较强,主要危害南方蓝莓产区的蓝莓,在北方未分离出该种病原菌,本研究首次报道间座壳真菌D.honagkongensis危害蓝莓。3.针对 Diaporthe hongkongensis及D.phaseolorum分别在 EF1-α及 ITS 基因片段特异区间设计种特异性引物EFhong1/2、Pha5/6,分别扩增出195 bp及302 bp目标DNA产物,实现对病原菌的早期检测,引物特异性及灵敏度较好,可检测出浓度为500 fg/μl的目标真菌DNA,且可从从发病程度不同的蓝莓茎部检测出目标真菌,蓝莓组织DNA及其他真菌对结果没有影响。4.利用D.hongkongensis、D.phaseolorum代表菌株分别对我国主栽的10个蓝莓品种进行不同蓝莓品种致病性测定,不同的蓝莓品种对间座壳溃疡病的敏感性具有较大的差异;对2种菌的代表菌株的表现略有不同:其中’爱国者’、’瑞卡’、’日出’、’奥林匹亚’、’都克’、’托柔’、’蓝丰’相对抗病;’北陆’、’埃利奥特’相对感病,’达柔’对Diaporthe hngkongensis相对感病,但是对 D.phaseolorum 相对抗病。
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