【摘 要】
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本研究通过重组PCR方法,从盐沼盐杆菌（Halobactrium salinarium）S9基因组上扩增了编码细菌视紫红质（bacteriorhodopsin,BR）蛋白的bop基因及启动子部分。测序结果表明,与NCBI数据
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本研究通过重组PCR方法,从盐沼盐杆菌（Halobactrium salinarium）S9基因组上扩增了编码细菌视紫红质（bacteriorhodopsin,BR）蛋白的bop基因及启动子部分。测序结果表明,与NCBI数据库中的bop基因及启动子的序列完全相同,且其表达产物的分子量与野生型BR蛋白的分子量一致,并且在568nm处表现出BR蛋白的特征吸收峰。采用基因定点突变的方法,构建了三个突变体,即单突变bopG649C,三突变bopT395C/A400T/G415C和四突变bopG649C/T395C/A400T/G415C。将突变基因以及野生型的基因分别连接到表达载体pXLNovR上,在宿主菌株L33（bop-）中进行了表达。突变基因表达的BR突变体分别为BRE204Q,BRI119T/T121S/A126T,BR(E204Q/I119T/T121S/A126T。经过紫外可见光谱的测定,单突变BRE204Q在552和570nm之间有个比较宽的吸收峰,三突变BRI119T/T121S/A126T在555nm和572nm之间有一个比较宽的吸收峰,四突变体BRE204Q/I119T/T121S/A126T在410nm和552nm都有一个吸收峰。通过对其M412闪光动力学的研究表明,单突变体BRE204Q的M态的寿命为7.10ms,三突变体BRI119T/T121S/A126TM态的寿命为8.23ms,四突变体BRE204Q/I119T/T121S/A126TM态的寿命为19.85ms,均较野生型的BR蛋白M态的寿命（6.23ms）有所延长,且四突变体表现的最为显著,其M态寿命比野生型BR蛋白增加了218.6%。对突变体质子泵功能的检测发现,突变体的质子泵功能也有所改变,其中单突变体BRE204Q和三突变体
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