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目的:通过观察三七花总皂苷对自发性高血压大鼠血压和心率的影响、对大鼠离体胸主动脉血管环收缩功能的影响、主动脉血管平滑肌细胞增殖的影响和Ca<2+>调控作用及相关因素的影响,探讨三七花总皂苷干预高血压病及Ca<2+>调控作用相关机制。
方法:(1)以自发性高血压大鼠为研究对象,应用Powerlab系统记录三七花总皂苷给药前后血压及心率的变化。(2)制作大鼠离体胸主动脉血管环,应用Powerlab系统,观察含钙条件下三七花总皂苷对去甲肾上腺素(NE)和高钾诱导预收缩的血管环张力的影响:无钙条件下三七花总皂苷对 NE 预收缩的血管环张力的影响;L型钙通道阻滞剂维拉帕米对三七花总皂苷舒血管作用的影响。(3)以主动脉血管平滑肌细胞为研究对象,去甲肾上腺素处理后,以维拉帕米为对照,观察不同剂量三七花总皂苷的作用。分别应用多种现代生物学前沿技术检测细胞增殖活力、细胞内钙离子浓度、钙调神经磷酸酶及蛋白激酶C活性。Western-blot技术检测三磷酸肌醇受体Ⅰ型(IP<,3>R<,1>)蛋白半定量表达;Real-Time PCR技术分析IP<,3>R<,3>、L型钙通道α<,1C>亚基、钙激活钾通道β<,3>亚基和氯通道ClC<,3>mRNA表达。
结果:(1)三七花总皂苷对自发性高血压大鼠收缩压、舒张压在一定剂量均有降低作用,对心率影响小。(2)含钙条件下,PNFS能明显降低NE、KCL诱导的血管环收缩幅度,并呈一定量效关系。无钙条件下,PNFS能明显降低NE诱导的血管环收缩幅度。L型钙通道阻滞剂维拉帕米预先孵育条件下,PNFS能明显降低NE诱导的血管环收缩幅度,并呈一定量效关系。(3)三七花总皂苷能够显著改善去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞增殖;降低细胞内钙离子浓度,降低去甲肾上腺素诱导的人主动脉血管平滑肌细胞内钙调神经磷酸酶和蛋白激酶C活性升高。三七花总皂苷能减低去甲肾上腺诱导血管平滑肌细胞IP<,3>R<,1>蛋白及mRNA表达;减低L型钙通道α<,1C>mRNA高表达;一定程度升高钙激活钾通道β<,1>亚基mRNA表达;降低氯通道C1C<,3>mRNA表达。
结论:三七花总皂苷能有效影响自发性高血压大鼠血压,直接舒张血管平滑肌,抑制细胞增殖,这一作用可能与影响血管平滑肌细胞Ca<2+>调控有关。三七花总皂苷防治高血压病的Ca<2+>调控机制可能在于通过多种途径影响细胞膜多种离子通道Ca<2+>内流和细胞IP3R内钙释放系统发挥Ca<2+>调控作用,从而降低细胞内钙离子水平,血管平滑肌舒张而发挥治疗干预高血压病的作用。