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本文从海南东寨港红树林、三江红树林、东方高坡岭、尖峰岭原始森林及黄流发病蕉园等地采集样品,分离得到215株放线菌,离体条件下测定了各菌株振荡培养发酵液对线虫的击倒活性,并对活性较强的菌株DA07118进行分类鉴定,主要研究结果如下:
在研究中,首先进行供试线虫培养,采用线虫培养基(实验室自制)培养香蕉根结线虫,28℃下恒温培养9d,线虫数量可以达到200头/cm2。以香蕉根结线虫为供试材料,初步建立了线虫液体筛选模型,并用该模型筛选获得了18株对线虫具有较强击倒效果的放线菌,24h校正击倒率都在80%以上。发酵液稀释5倍后对线虫的击倒效果最好的是:DA07041和DA07118,其校正击倒率分别为72.1%和83.7%。
初步探索了高活性的2株放线菌对线虫的作用方式。DA07041在12h内对线虫达到89.5%的校正击倒率,清水处理能恢复活动性,24h时仍有33.9%的恢复活动性。DA07118在8h内对线虫达到100%的击倒效果,但清水处理后不能恢复活性;处理24h后活性不能恢复。经继代培养5代后测活,发现菌株DA07118具有稳定产生抗线虫活性物质的能力。
通过对菌株DA07118的形态特征、培养特征、生理生化特征、16S DNA序列测定及其系统发育分析的研究,将菌株DA07118鉴定为Streptomyces sp.DA07118。
研究明确了菌株DA07118的最佳发酵条件和培养基组成。确定菌株DA07118最佳培养基组成及发酵条件为:麦芽糖1.0%,蔗糖2.5%,酵母膏2.0%,蛋白胨2.0%,K2HP040.05%;初始pH7.0,种龄48h,接种量10%,培养温度28℃,250mL三角瓶装液量75mL,发酵培养5d。通过发酵优化,菌株DA07118发酵液稀释10倍后,24h对香蕉根结线虫的校正击倒率从优化前的75.0%提高到93.7%。
对菌株DA07118所产抗线虫活性物质的稳定性做了初步研究,结果表明,菌株DA07118所产的抗线虫活性物质对热和光敏感,在强酸强碱条件下活性不稳定。