目的:构建MGMT干扰质粒载体,并探讨其对奥沙利铂抗肝癌细胞作用的影响。方法:1、通过RNA干扰技术构建MGMT干扰质粒载体,通过质粒测序和PCR菌检鉴定质粒,获得干扰载体pENTR-U6-shRNA1-GFP和pENTR-U6-shRNA2-GFP。2、将细胞分为4组:空白对照组即未转染质粒的smmc-7721细胞KB组,转染pENTR-U6-shRNA1-GFP的smmc-7721细胞shRNA1组,转染pENTR-U6-shRNA2-GFP的smmc-7721细胞shRNA2组,转染阴性对照组质粒的smmc-7721细胞NC组,荧光显微镜观察转染效果,通过Realtime-PCR检测质粒转染smmc-7721细胞前后MGMT mRNA的表达水平,验证MGMT shRNA的干扰效果。3、以浓度2μg/mL,4μg/mL,8μg/m L,16μg/m L,32μg/mL,64μg/m L,128μg/m L,256μg/mL的奥沙利铂处理上述4组肝癌细胞48小时,MTT法计算各组smmc-7721的IC₅₀,对比转染前后smmc-7721的IC₅₀,评估MGMT干扰质粒载体对奥沙利铂抗肝癌细胞作用的影响。4、采用SPSS软件进行统计学分析。结果:1、经酶切鉴定、基因测序及PCR菌检验证,MGMT基因的RNAi质粒载体的目的序列与设计序列完全一致,成功构建pENTR-U6-shRNA-GFP干扰质粒;2、将质粒转染smmc-7721细胞,经荧光显微镜观察,转染pENTR-U6-shRNA1-GFP的smmc-7721细胞shRNA1组,转染pENTR-U6-shRNA2-GFP的smmc-7721细胞shRNA2组,转染阴性对照组质粒的smmc-7721细胞NC组,均有绿色荧光出现,干扰质粒成功转染到肝癌细胞中;Realtime PCR结果显示shRNA1和shRNA2均有干扰效率分别为56%和63%;3、实验组细胞中,shRNA1组的IC₅₀为2.31μg/mL、shRNA2组为1.98μg/mL,与对照组（NC组为5.00μg/mL、KB组为6.17μg/mL）细胞的IC₅₀相比明显降低（P₁<0.05,P₂<0.05,P₃<0.05,P₄<0.05）。结论:本实验成功构建MGMT干扰质粒载体,转染肝癌细胞smmc-7721后可有效地使MGMT基因mRNA水平表达明显降低,同时降低转染后smmc-7721细胞奥沙利铂的IC₅₀,为探讨MGMT干扰载体在促进奥沙利铂杀伤肝癌细胞的分子机制及揭示MGMT与肝癌的关系提供了研究工具,奠定了技术基础。