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雷莫拉宁是一种缩酚肽类(depsipeptide)抗生素,对包括甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌(methicillin-resistant Staphylococcus aureus MRSA)、万古霉素耐药肠球菌(vancomycin-resistant Enterococcus faecium VRE)等耐药菌在内的革兰氏阳性菌具有很广的抑菌活性。orf20是雷莫拉宁生物合成基因簇中唯一的卤化酶基因,失活orf20可能得到脱氯的雷莫拉宁衍生物,为异源表达卤化酶产生新的糖肽类化合物提供条件。本研究敲除了orf20内编码64个氨基酸的核苷酸序列,得到突变株SIPI-GE.2006 dorf20(△orf20)。该突变株发酵产物中检测到少量与脱氯雷莫拉宁分子量一致的化合物。在此基础上,我们构建了orf20回补突变株SIPI-GE.2006 dorf20(△orf20)Rorf20(orf20-1)和SIPI-GE.2006 dorf20(△orf20)Rorf20(orf20-2).发酵液经HPLC和LC-MS检测,证实均有雷莫拉宁生成。本研究证明了雷莫拉宁生物合成基因簇中orf20的功能,为其组合生物合成工作打下了基础。由于雷莫拉宁与糖肽类抗生素Mannopeptimycin的糖基近似,推测雷莫拉宁糖基化机制与Mannopeptimycin相似,也是在细胞内合成聚肽前体,然后转运至细胞膜外糖基化形成最终产物。因此,倍增转运蛋白基因可能会促进雷莫拉宁的合成。本研究将pSM-11和pSM-12转入SIPI-A.2006,分别构建了ABC转运蛋白基因倍增突变株SIPI-GE.2006 Rorf8(orf8)和SIPI-GE.2006 Rorf23(orf23)。RT-PCR显示倍增基因的转录水平都有提高,但突变株发酵产量没有增加,也没有提高菌株对产物的耐受性。因此,我们推测orf8和orf23基因编码的酶可能具有其它功能。