α-2b干扰素单克隆抗体的制备、鉴定及检测方法研究

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目的:建立a-2b干扰素(interferon a2b,IFN-a2b)杂交瘤细胞株,对其分泌的特异性IFN-a2b单克隆抗体(Monoclonal Antibody,McAb)进行生物学特性鉴定,并将之作为诊断试剂,建立IFN-a2b双抗体夹心ELJSA检测方法。 方法:采用杂交瘤细胞技术,以惠赠的a-2b干扰素(IFN-a2b)和白蛋白融合a-2b干扰素(HSA-IFN-a2b)抗原蛋白作为免疫原,分别免疫。BALB/c小鼠,取脾细胞与Sp2/0小鼠骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA法鉴定阳性克隆和有限稀释法克隆培养,共制备出8株能持续分泌抗IFN-a2b McAbs的杂交瘤细胞株。对McAbs进行鉴定分析,对杂交瘤细胞的染色体进行分析;采用鼠单抗定型Immunotype试剂盒进行亚型分析;间接ELISA法测定了效价、相对亲和常数;Western blot法、免疫组化法确定McAbs的特异性;并对IFN-a2b McAbs用辣根过氧化物酶标记,进行了初步的应用。 结果:获得8株能稳定分泌高效价IFN-a2b McAbs的杂交瘤细胞株。184、11E2、987、7E8、16F11抗体亚型为IgG1/k类,4H8、13G4为IgG2a/k类,12F3为IgG2b/k类。杂交瘤细胞染色体数目为100条左右。间接ELISA法检测细胞培养上清效价为10<5>~10<6>,腹水效价为10<5>~10<7>。间接ELISA法检测亲和力依次为12F3>13G4>184>4H8>987>7E8>11E2>16F11。Western blot实验、免疫组化实验证明:8株McAbs与IFN-a2b蛋白均有特异性反应。成功的对IFN-a2b McAbs用辣根过氧化物酶标记,但是单抗间不能配对。 结论:制备了8株抗IFN-a2b的McAbs,均具有良好的特异性和亲和力;并对IFN-a2bMcAbs用HRP成功的进行了标记,但其单抗间不能配对。
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