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DNA甲基化是哺乳动物表观遗传修饰最为常见的方式，由于其直接参与调控体内多种基因的表达和功能实现，与细胞的分化和发育、基因印记和激活[1]、机体衰老等生命活动息息相关，因此，一旦基因甲基化功能发生异常，即有可能诱导肿瘤的发生，尤其是发生于抑癌基因特定区域的高度甲基化将导致抑癌基因在转录时即发生失活，丧失抑制细胞增殖信号转导及负性调节细胞周期的作用[2,3]。miR-200c是新近发现的一种具有抑制肿瘤细胞生长的抑癌基因，现有研究证实其在高分化肿瘤中的表达水平要高于分化较差、侵袭性较强的肿瘤[4]，其作用机制可能与miR-200c表达缺失所介导的肿瘤细胞上皮细胞间质转化(EMT)密切相关。发生EMT转化的肿瘤细胞可通过多种方式在肿瘤侵袭和转移早期发挥重要作用，并显著推进恶性肿瘤的进展，并且同肿瘤细胞对抗肿瘤药物的疗效不佳具有相关性。目前认为，miR-200c基因启动子区域发生高度甲基化是其在肿瘤细胞内失活的主要原因[5]，其中TGF-β信号通路可能参与了该可逆性的甲基化之中。miR-200c下游的重要靶点之一便是TUBB3，其3’UTR（3’untranslated region）区能够与miR-200c核心序列相结合，并被miR-200c所指导的沉默复合体RISC降解。而TUBB3又是紫杉醇类抗微管药物疗效相关的重要靶标，其在肿瘤细胞内的表达程度同紫杉醇类药物的疗效成负相关[6]。因此，我们对联合运用去甲基化药物地西他滨与紫杉醇能否提高对非小细胞肺癌细胞系增殖、凋亡的影响，以及该种联用是否通过上调miR-200c影响TUBB3的表达及EMT的功能状况等进行探讨和研究。本实验以非小细胞肺癌细胞系H1975、H1299为研究对象，随机分为四组，分别为对照组，地西他滨组、紫杉醇组、联合组（地西他滨+紫杉醇处理）。首先采用MTT实验分别确定地西他滨与紫杉醇的工作浓度，后续实验分别以各自的工作浓度进行，H1299细胞系地西他滨工作浓度15.2umol/L，紫杉醇工作浓度为64.9nmol/L；H1975细胞系地西他滨工作浓度18.7umol/L,紫杉醇工作浓度为11.2nmol/L。各组分别按照实验分组进行处理后置于37℃、5%CO2条件下恒温培养，96h后均以MTT法测得地西他滨组、紫杉醇组及联合组对H1299细胞的增殖抑制率（%）分别为：(32.97±2.76)、(55.23±2.20)、(82.51±2.18)；H1975细胞的增殖抑制率则为(43.11±2.23)、(47.71±4.74)、(74.67±3.70)。联合组同单纯地西他滨及单纯紫杉醇应用组比较，其增殖抑制率均差异显著（P<0.05）。流式细胞术检测H1299细胞各组的细胞凋亡率（%）分别为：(1.87±0.52)、(19.33±0.57)、(37.03±1.81)、(71.8±1.84)；H1975细胞各组的细胞凋亡率分别为：(2.43±0.53)、(16.5±2.61)、(44.13±2.50)、(68.2±2.02)。地西他滨联合紫杉醇组同地西他滨组及紫杉醇组比较亦具有统计学意义（P<0.05）。实验证明，地西他滨与紫杉醇类药物联合运用的协同抗非小细胞肺癌的作用更明显。此外，Realtime PCR检测两种细胞中miR-200c各组的表达情况，显示在地西他滨组及联合组中，miR-200c的表达水平提高，而在对照组与紫杉醇组中无显著差异；Luminex液相芯片仪流式荧光法检测TUBB3mRNA的变化趋势，提示在地西他滨组及联合组中，TUBB3mRNA的表达水平降低，对照组及紫杉醇组无显著差异；Westernblot法检测EMT标志物E-cadherin及Vimentin在H1975及H1299中表达情况，地西他滨及联合组E-cadherin表达增高而Vimentin下调，同无地西他滨应用组比较存在差异。实验提示，该种联合可能是通过上调miR-200c的表达进而诱导非小细胞肺癌细胞TUBB3mRNA表达降低及逆转EMT。我们将H1975细胞作为研究对象，以不同浓度梯度的地西他滨处理，96h后倒置显微镜下观察细胞形态学变化，并分别检测各组细胞中miR-200c，TUBB3及E-cadherin的表达水平，研究结果发现：对照组H1975细胞形态呈梭形，为较典型的类间质细胞表型，生长状况良好，数量较多；而施加不同浓度地西他滨干预的试验组则在浓度提高至20μmol/L时部分细胞出现梭形的改变，部分出现类似上皮细胞的表型，且细胞数量少于对照组；miR-200c与E-cadherin随地西他滨的浓度的增高而表达水平提高；TUBB3mRNA和Vimentin则随地西他滨的浓度增高表达水平降低。综上所述，我们探讨了地西他滨联合紫杉醇在非小细胞肺癌细胞系中应用对其增殖、凋亡的影响，通过研究证实了该种联用具有协同作用。且该种联用可能是通过上调非小细胞肺癌细胞内的miR-200c的表达水平从而影响TUBB3mRNA的表达，增强了紫杉醇类药物对非小细胞肺癌细胞的作用。地西他滨的这种上调miR-200c表达的作用间接诱导了肿瘤细胞发生MET，且与其浓度水平相关。由于EMT现象的逆转与对抗肿瘤药物的疗效相关，故认为该种药物联合可能也通过此机制以实现对非小细胞肺癌的协同作用。