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乳腺癌是一种对妇女身心健康及生命造成严重危害的恶性肿瘤,其发病率逐年上升,迄今世界上每年约有130万人被诊断为乳腺癌,而有40万患者致亡在我国的一些城市,乳腺癌的发病率已成为妇女恶性肿瘤第一位,病死率为第四位。建立乳腺癌细胞系有利于深入了解乳腺癌癌细胞的生物学特性及抗癌药物的筛选。目前,国内外鲜有以中国人种为来源的乳腺癌细胞系建立的报道,使得对中国人种的乳腺癌研究缺少了良好的实验材料。本研究成功建立了40株乳腺癌细胞系(共取样52份乳腺癌组织),并从中挑选出BC-023. BC-024和BC-034三株细胞系进行鉴定,结果显示:1.三株细胞系均为上皮状细胞,己稳定传代至20代以上,BC-023、BC-024和BC-034三株细胞系的群体倍增时间分别为35小时、39小时和33小时;2.在三株细胞系中均没有发现细菌、真菌及支原体污染;3.经检测,三株细胞系均为人源细胞系,无其他种属细胞系污染;4.三株细胞系C-erbB-2基因表达均为阳性;5.三株细胞系均能在10天左右在裸鼠体内结瘤,结瘤率为100%,且在BC-024细胞系注射组中各发现1只(1/10)裸鼠的肿瘤有转移现象。BRCA1是乳腺癌易感基因之一,与家族性乳腺癌相关,其突变将大大提高乳腺癌的发病率。约有5%—10%的乳腺癌患者表现出家族遗传性。BRCA1自1994年被分离以来,许多学者致力于BRCA1结构和功能的研究。通过克隆BRCA1基因的全长cDNA,研究者得到了多种BRCA1可变剪接体。而mRNA的可变剪接使一个基因可编码多个不同转录产物和蛋白质产物,是导致蛋白质功能多样性的重要原因之一。本研究提取ZR-75-30细胞系的总RNA,依照已报道的BRCA1基因cDNA序列设计引物,进行RT-PCR,得到1种新的BRCA1剪接形式。这种新的剪接体被命名为BRCAl-ElaA-△2-17,它缺失exon 11 b,保留了开放阅读框并且遵守GT-AG规则。将其序列登陆GenBank,得到序列号为DQ333386.BRCA1-ElaA-△2-17保留了部分内含子序列,在exon la处延长了89nt,并有一个新的exon la 3’剪接位点。RT-PCR分析多种癌组织及细胞mRNA的表达,BRCAl-ElaA-△2-17在A549,ACCM,ACHN,MRC-5,K562以及所有检测的人乳腺癌组织中都有表达但在正常人乳腺组织中没有表达。Westernblot实验说明ZR-75-30细胞系BRCAl表达有BRCAl-ElaA-△2-17,这与RNA水平结果一致。一直以来,对BRCAl亚细胞定位都存有争议。本研究将BRCAl-ElaA-△2-17插入表达载体pEGFP-Cl中以构建融合表达体系。然后将融合表达载体转入Cos7,HeLa和MCF7细胞中,荧光显微镜和共聚焦荧光显微镜观察荧光在细胞中的分布,发现转入pEGFP-Cl的细胞绿色荧光充满整个细胞,而转入pEGFP-ElaA-△2-17的细胞荧光面积较小,且呈现点状分布。EGFP-ElaA-△2-17在转染细胞内的分布和EGFP-Cl的分布不同,且不依赖于转染所用细胞类型。为了进一步研究BRCAl-ElaA-△2-17在细胞中的功能,本研究以MTT法和流式检测转染细胞的凋亡。综合以上研究发现乳腺癌易感基因BRCAl有多种可变剪接体,其中本研究新发现的BRCAl-ElaA-△2-17可能具重要的生物学功能,在乳腺癌/卵巢癌的发生过程中具有重要的作用。