【摘 要】
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目的:观察荷载脂质体在体外转染人宫颈癌细胞（Hela）及小鼠耳蜗螺旋神经节神经元（spiral ganglion neurons,SGNs）的转染率差异,为制备纳米基因载体的研究提供基础数据。方法:（1）建立
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目的:观察荷载脂质体在体外转染人宫颈癌细胞（Hela）及小鼠耳蜗螺旋神经节神经元（spiral ganglion neurons,SGNs）的转染率差异,为制备纳米基因载体的研究提供基础数据。方法:（1）建立机械分离体外培养小鼠SGNs的方法,并进行β3-Tubulin免疫组化染色鉴定;（2）利用阳离子脂质体作为载体,将携带神经营养素3（Neurotrophin3,NT-3）和增强型绿色荧光蛋白（Enhanced green fluorescent protein,EGFP）基因的重组质粒pEGFPC2-NT3分别对SGNs及Hela细胞进行瞬时转染,分别计算其转染率;（3）用免疫组化（DAB）法观察EGFP和NT-3在两种细胞中的表达差异。结果:（1）耳蜗螺旋神经节神经元培养12小时贴壁生长,72小时后细胞最多,约50个/cm2。经β3-Tubulin免疫组化染色,显示这些细胞为神经细胞;（2）荧光显微镜下观察Hela细胞转染率约60%,SGNs转染率约10%～15%;（3）GFP、NT-3免疫组化染色显示,两种分子在Hela细胞中的转染率均显著大于在SGNs中的转染率。值得注意的是,在这两种细胞中,NT-3的转染率均大于GFP。结论:（1）对同一种荷载脂质体而言,Hela细胞的体外基因转染率明显大于SGNs;（2）在同一类培养的细胞系中,治疗基因NT-3的转染率大于报告基因EGFP。结果提示,向神经元转染治疗基因需要更高效的基因载体;以报告基因的表达体现的转染率并不一定是治疗基因真实的转染率或表达情况,在分析体外基因转染结果时需要予以考虑。
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