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从H9N2亚型禽流感病毒在我国首次发现至今已有三十年的时间，虽然该亚型病毒属于低致病性禽流感病毒，不会造成家禽大面积死亡，但是该病毒引起的家禽免疫功能障碍、蛋禽的产蛋下降等给我国的养禽业带来了巨大的经济损失。从已有报道分析，H9N2亚型AIV已成为中国当前禽流感病毒的主要亚型。鉴于HA和NA在流感病毒致病力、宿主特异性等方面的重要作用，监测HA和NA基因的变异情况，有非常重要的意义。一、 H9N2亚型禽流感病毒的分离鉴定及HA和NA基因的变异分析本试验采集了2010年至2012年山东多个地区如潍坊、烟台、泰安、东营等地疑似H9N2亚型禽流感的病料，通过分离鉴定共得到16株该亚型病毒，对这些毒株的HA和NA基因进行克隆测序，分析其变异情况和进化关系，结果显示，16个分离株HA基因核苷酸同源性为96.3％～99.9％，推导的氨基酸同源性为97.1％～99.6％，NA基因核苷酸同源性为92.7％～99.1％，推导的氨基酸同源性为95.1％～99.8％，HA和NA基因都属于Y280-like分支。16个分离株HA蛋白的裂解位点均为RSSR↓GLF，没有多个连续的碱性氨基酸插入，符合低致病性禽流感病毒的分子特征。HA蛋白潜在糖基化位点数为7～9个，16个分离株的313位均出现了新的糖基化位点NCS，有两株病毒在166位出现了新的潜在糖基化位点，分别为NNS和NNT，还有两株分别在141位和218位出现糖基化位点的缺失；受体结合位点除198位有变异外，其他位点均较保守，受体结合位点的左侧臂226位氨基酸均为L，具有与哺乳动物唾液酸α,2-6受体结合的特征。NA蛋白颈部63～65位点氨基酸缺失是大陆H9N2亚型AIV的分子标志，本研究中的16个毒株NA蛋白颈部63～65位点均缺失了T、E、 I3个氨基酸；唾液酸结合位点(HB)发生了明显的变异，在366～373氨基酸位点区域368位点变异较大，399～404氨基酸位点区域402位点变异较大，431～433氨基酸区域未出现变异，发现4株与人源H9N2AIV的HB位点相同的毒株；第69、86、146、200、234位的糖基化位点比较保守，部分毒株在264、331、402位出现糖基化位点缺失，10/16毒株失去了402位点处的潜在糖基化位点，同时在264位点处出现新的潜在糖基化位点，这一变异符合山东地区分离株的特点；抗原决定簇位点中153、328、368、402处的氨基酸变异较活跃；氨基酸酶活性位点处的氨基酸非常保守，没有发生与抗神经氨酸酶抑制剂奥塞米韦和扎那米韦相关的氨基酸突变。二、分离毒株致病力的测定参照NDV致病力测定的试验方法，测定鸡胚半数感染量（EID50）、鸡胚平均死亡时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内接种指数（ICPI）、6周龄鸡静脉接种指数（IVPI）和人工感染8周龄SPF鸡排毒试验，结果显示，16个病毒的鸡胚半数感染（EID50）为10-6.25/0.2mL~10-7.69/0.2mL，鸡胚平均死亡时间（MDT）为91.6h~105.9h；以这两组数据为参考，选择SD01、 SD04、SD07、SD14和SD16株病毒测其ICPI和IVPI以及人工感染8周龄SPF鸡排毒试验，结果显示，五个毒株ICPI和IVPI均为0，排毒期均为5天。