Levan型果聚糖在多种生物体中均有存在,表现出各种不同的生物功能性,在食品、药品等行业表现出巨大的应用潜力。微生物和植物中的levan含量低且不易提取,而利用果聚糖蔗糖酶（levansucrase）催化合成的levan纯化较为容易,操作也更简便。目前通过微生物发酵法产生的果聚糖蔗糖酶难以从发酵产物中分离出来,不利于后续的研究和工业中的应用。Bacillus subtilis是一种安全的食品级微生物,具有操作简易、生长快、不产内毒素等优点。同时,B.subtilis拥有强大的分泌蛋白的能力,可应用于异源蛋白的分泌表达研究。本论文将源于B.amyloliquefaciens BH072的果聚糖蔗糖酶基因sacB插入带有信号肽Amy Q的穿梭质粒pHT43中,导入B.subtilis 168中进行表达,对分泌出的重组酶Ba-SacB的性质进行探究。通过共价结合的方式将酶固定在磁性纳米材料上,获得了稳定性高和可重复使用的固定化酶。主要的实验结果列举如下:（1）通过氨基酸序列同源性对比,预测了B.amyloliquefaciens来源的果聚糖蔗糖酶的活性位点。以B.amyloliquefaciens BH072的全基因组为模板,扩增出sacB,再将该基因与含信号肽Amy Q和启动子Plac的诱导型质粒pHT43连接,在Escherichia coli中验证正确后转化至B.subtilis 168中。为了提高重组酶的生产量,对重组菌株的表达条件进行了优化,发现最佳的诱导剂IPTG浓度为40μM、诱导时间为16 h。此外,外源基因的导入对B.subtilis 168的生长没有影响。（2）探究了Ba-SacB的活力大小及相关性质,该酶在最适反应温度为40℃,在6 m M Ca Cl2的反应缓冲液（pH 6.0）中,酶的比活力值可达最高,为283.77±0.3 U/mg。运用Lineweaver-Burk双向倒数法测定了Ba-SacB的反应动力学参数,在以蔗糖为底物时,测得酶的Km为0.71 m M,Vm为0.49μmol·（min·mg）-1。利用Ba-SacB催化合成levan型果聚糖时的最佳条件为:150μg/m L酶液,200 g/L蔗糖,20 m M Ca Cl2,0.05 M Na2HPO4/Na H2PO4缓冲液（pH 7.0）,反应温度为35℃,反应9 h。此条件下,蔗糖转化率为65.21%,levan的产率为39.17%。（3）运用水热法制备出了磁性纳米粒子Fe3O4MNPs,验证出Fe3O4MNPs具有良好的磁性,被EDC-NHS共修饰后可与重组酶Ba-SacB共价结合成固定化酶Ba-SacB@Fe3O4MNPs,该固定化酶展现出较好的稳定性,对温度和pH的耐受性均高于游离酶,且可重复使用。Ba-SacB@Fe3O4MNPs应用于levan合成的最佳条件为:150μg/m L固定化酶酶液,200 g/L蔗糖,5 m M Ca Cl2,0.05 M Na2HPO4/Na H2PO4缓冲液（pH 7.0）,反应温度为45℃,反应9 h。此条件下测得蔗糖转化率为63.42%,levan型果聚糖的产率为37.81%。同时利用红外法对产物levan的各特征峰也进行了表征。