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目的:探索锌alpha2糖蛋白(Zinc alpha2 glycoprotein,ZAG)调节小鼠巨噬细胞RAW264.7的M2极化作用及其机制。方法:1.ZAG重组蛋白干预RAW264.7细胞(M0型)后,Q-PCR检测M1及M2型标志因子变化,流式细胞仪鉴定M1及M2型比例。2.ZAG重组蛋白干预棕榈酸(Palmitic acid,PA)诱导的RAW264.7细胞(M1型),Q-PCR检测M1及M2型标志因子变化,流式细胞仪鉴定M1及M2型比例。3.ZAG重组蛋白干预RAW264.7细胞,Western blot检测STAT3及其磷酸化蛋白的表达情况,免疫荧光分析p-STAT3的核转位;慢病毒介导的STAT3沉默病毒(LV-STAT3-RNAi)感染RAW264.7细胞,然后用ZAG重组蛋白干预,Q-PCR检测M1及M2标志因子变化,流式细胞仪鉴定M1及M2型比例。4.ZAG重组蛋白干预RAW264.7细胞,Western blot检测β3肾上腺素受体(beta 3 Adrenergic Receptor,β3-AR)的蛋白表达;β3-AR沉默慢病毒(LV-β3-AR-RNAi)感染RAW264.7细胞,然后用ZAG重组蛋白干预,Western blot检测STAT3及其磷酸化蛋白的表达情况,免疫荧光检测p-STAT3的核转位。5.ZAG重组蛋白干预RAW264.7细胞,Western blot检测蛋白激酶A(Protein kinase A,PKA)及其磷酸化蛋白的表达;PKA通路抑制剂H89处理RAW264.7细胞,然后用ZAG重组蛋白干预,Western blot检测STAT3及其磷酸化蛋白的表达情况,免疫荧光检测p-STAT3的核转位。结果:1.ZAG调节RAW264.7细胞由M0向M2型极化Q-PCR结果提示ZAG上调M2型标志因子(CD206、TGF-β、Arg-1)的表达(P<0.05),下调M1型标志因子(IL-6、IL-1β、iNOS)的表达(P<0.05);流式细胞学结果提示ZAG增加M2型巨噬细胞比例。2.ZAG调节RAW264.7细胞由M1向M2型极化ZAG重组蛋白干预PA诱导的RAW264.7细胞(M1型),Q-PCR结果提示ZAG上调M2型标志因子(CD206、TGF-β、Arg-1)的表达(P<0.05),下调M1型标志因子(IL-6、IL-1β、iNOS)的表达(P<0.05);流式细胞学结果提示ZAG增加M2型巨噬细胞比例。3.STAT3信号通路介导ZAG诱导巨噬细胞向M2型极化(1)Western blot结果提示ZAG促进STAT3的活化;免疫荧光结果提示ZAG促进p-STAT3的核转位。(2)Q-PCR结果提示STAT3沉默后,ZAG诱导的M2型标志因子(CD206、TGF-β、Arg-1)表达下降(P<0.05),M1型标志因子(IL-6、IL-1β、iNOS)表达增加(P<0.05);流式细胞学结果提示,STAT3沉默后,ZAG诱导的M2型巨噬细胞比例下降。4.ZAG通过β3-AR/PKA信号通路诱导STAT3的活化(1)Western blot结果提示ZAG上调RAW264.7细胞中β3-AR的蛋白表达;β3-AR沉默后,ZAG诱导的p-STAT3表达下调,p-STAT3的核转位减少。(2)Western blot结果提示ZAG上调RAW264.7细胞中p-PKA的蛋白表达;H89阻断RAW264.7细胞中的PKA信号通路后,ZAG诱导的p-STAT3表达下调,p-STAT3的核转位减少。结论:ZAG通过激活β3-AR/PKA/STAT3信号通路促进小鼠巨噬细胞向M2型极化。