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目的:褐藻多糖硫酸酯(Fucoidan),又称褐藻糖胶、岩藻聚糖或硫酸聚糖,是褐藻细胞壁外层含有的特殊藻胶,为褐藻利用光和营养所必须。Fucoidan是一种水溶性胞外多糖,是一类主要由岩藻糖,少量半乳糖、木糖、葡萄糖醛酸等组成的不均一硫酸化多糖。研究表明,Fucoidan具有多种生物学活性,在体内、体外实验中,对多种肿瘤细胞均表现出明显的抑制增殖效应。本文旨在探讨Fucoidan诱导A549细胞凋亡的分子机制。方法:1.采用热水浸提乙醇分级沉淀法从裙带菜孢子叶干粉中提取褐藻多糖硫酸酯;硫酸-苯酚法检测所提样品中的糖含量;硫酸钡比浊法检测硫酸根含量;硫酸咔唑比色法检测糖醛酸含量。2. MTT(四甲基偶氮唑盐)比色法检测褐藻多糖硫酸酯对A549细胞增殖的抑制作用;MTT比色法检测其对A549粘附的抑制作用;Transwell小室法检测其对A549迁移的抑制作用。3.制备Fucoidan抗体;利用ELISA与免疫荧光的方法检测血清中的抗体水平和与A549细胞的结合。4. Western Blot方法检测经Fucoidan处理后A549细胞中凋亡相关蛋白Caspase-3的表达情况;分光光度法检测Caspase-8,9酶活性的变化;RT-PCR检测Survivin mRNA表达水平。结果:1.提取所得Fucoidan样品的平均得率约为32.5%,20℃样品旋光度为0.99°,样品中总糖含量为59.2%,硫酸根含量为21%,糖醛酸含量为9.13%。2. Fucoidan对A549细胞的增殖有抑制作用,并呈现时间剂量依赖关系;Fucoidan对A549粘附、迁移均有显著抑制作用。3. ELISA结果显示:完全佐剂与100mg/kg Fucoidan组的小鼠血清可检测到抗Fucoidan抗体,用免疫荧光法进一步验证了Fucoidan抗体可结合在A549细胞表面。4. Western Blot结果显示:Fucoidan呈剂量依赖方式活化Caspase-3;酶活性检测结果表明Fucoidan激活Caspase-8,Caspase-9;RT-PCR结果表明Fucoidan下调Survivin mRNA的表达。结论:1. Fucoidan对人肺腺癌细胞A549增殖、粘附与迁移均有显著抑制作用。2. Fucoidan对A549细胞有诱导凋亡的作用,并通过外源性途径和内源性通路共同来介导的。