论文部分内容阅读
肺炎克雷伯菌（Klebsiella pneumoniae）属肠杆菌科细菌、革兰染色阴性杆菌，是引起医院内感染的病原菌之。肺炎克雷伯菌引起的侵袭性感染可导致器官（如肾脏、脾脏、大脑和前列腺）和组织的脓肿，特别是近年来，由肺炎克雷伯菌引起的社区获得性(community-acquired)的化脓性肝脓肿有增加的趋势。此外，携带编码超广谱β-内酰胺酶（extended-spectrumbeta-lactamases, ESBLs）质粒的多重耐药肺炎克雷伯菌所致医院内感染的报告也逐年上升。多重耐药细菌的不断出现方面导致抗生素疗效的下降，另方面亦大大增加了耐药性细菌在病人体内定植的可能性。噬菌体是种可以特异性裂解细菌的病毒，广泛存在于自然界。利用噬菌体治疗细菌性感染，称为噬菌体疗法。本论文目的是分离裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体并分析生物学特性，为噬菌体用于耐药性肺炎克雷伯菌的感染提供初步的前期工作。本项研究以25株肺炎克雷伯菌临床分离株为宿主菌，从医院污水中分离出4株裂解性肺炎克雷伯菌噬菌体(分别命名为φKp-lyy15、φKp-lyy17、φKp-lyy19和φKp-lyy22)。透射电镜观察显示，4株噬菌体的形态学特征符合有尾病毒目(theCaudovirales)，其中噬菌体φKp-lyy15和φKp-lyy19为长尾病毒科(Siphoviridaefamily)噬菌体；噬菌体φKp-lyy17属于足尾病毒科(Podoviridae family)噬菌体；而噬菌体φKp-lyy22则属于滴状病毒科(Guttaviridae family)噬菌体。通过生物学特性的分析发现，(1)噬菌体φKp-lyy22的潜伏期为15min、爆发期的时间近80min，爆发量为60PFU/cell。此外，φKp-lyy22仅能裂解3株肺炎克雷伯菌分离株（裂解率为12%），说明裂解谱较窄；(2)噬菌体φKp-lyy15的潜伏期为10min、爆发期的时间为30min，爆发量为65PFU/cell；(3) φKp-lyy15的基因组为dsDNA、含有EcoR V、Nde I和Bgl II的酶切位点；(4) φKp-lyy15的SDS-PAGE分析，可见3个主要蛋白条带和8个次要蛋白条带，其相对分子量在15～170kDa之间；(5)噬菌体φKp-lyy15可裂解8株肺炎克雷伯菌分离株（裂解率为32%），说明具有较宽的裂解谱；(6)稳定性试验显示，噬菌体φKp-lyy15在pH4～10的范围内以及在50℃～60℃的条件下仍可有效裂解宿主菌。综上所述，1.本项工作分离的4株肺炎克雷伯菌噬菌体为裂解性噬菌体，噬菌体φKp-lyy15和φKp-lyy19属有尾病毒目、长尾病毒科噬菌体；噬菌体φKp-lyy17和φKp-lyy22则分别属于足尾病毒科和滴状病毒科噬菌体。2.通过生物学特性的分析发现，噬菌体φKp-lyy15是潜伏期短、裂解性强、裂解谱宽以及对pH和温度具有耐受性的裂解性噬菌体，为进步研究利用噬菌体治疗耐药性肺炎克雷伯菌感染提供了可能。