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目的：研究五子衍宗方总黄酮（Total flavonoids from Wuzi Yanzong prescription, TFWZ）对环磷酰胺（Cyclophosphamide, CTX）所致小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤的保护作用与机制，为进一步研究CTX等化疗药物生殖毒性的机制提供新的方向。 方法：将BALB/C小鼠随机分为正常对照组，模型对照组，TFWZ低和高剂量组。TFWZ低、高剂量组分别提前灌胃给予TFWZ140和280 mg/kg，正常对照组和模型对照组均灌胃给予等体积生理盐水。从第三天开始，除正常对照组外，其余各组腹腔注射CTX50 mg/kg，隔两天1次，连续10次，而正常对照组腹腔注射生理盐水；同时各组继续灌胃给予相应药物或生理盐水。末次给予CTX后禁食不禁水，12 h后称取小鼠体质量，眼球取血，颈椎脱臼处死小鼠。(1)取双侧睾丸和附睾，称重并计算睾丸指数和附睾指数；(2)参照人类精液分析方法检测小鼠精子浓度、精子形态正常率、精子活率；(3) HE染色观察小鼠睾丸组织形态变化；(4) TUNEL检测小鼠睾丸细胞凋亡的变化；(5) Western blot检测小鼠睾丸生殖细胞内凋亡标志蛋白Caspase-3表达变化；(6)单细胞凝胶电泳技术观察小鼠睾丸细胞DNA损伤的变化；(7)免疫组化检测小鼠睾丸DNA损伤标志蛋白γ-H2AX的定位与表达；(8) Western blot检测小鼠睾丸生殖细胞内DNA损伤相关蛋白γ-H2AX、Ku70以及p-P53蛋白表达变化。 结果：(1) CTX处理后小鼠体重、睾丸重量、睾丸指数、附睾重量、附睾指数均显著降低；TFWZ可使小鼠体重，睾丸重量，睾丸指数，附睾重量，附睾指数升高；(2)与正常对照组相比，模型对照组小鼠精子浓度、精子形态正常率、精子活率显著降低；而TFWZ可显著升高小鼠精子浓度、精子形态正常率、精子活率；(3) HE染色结果发现，正常对照组小鼠睾丸生精小管基膜完整；基膜内可见排列丰富整齐的各级生精细胞和支持细胞，管腔内可见精子；模型对照组小鼠生精小管基膜变得不完整；基膜内生精细胞的排列紊乱，生精细胞层数明显减少。而TFWZ干预后小鼠睾丸生精小管基膜较为完整，基膜内生精小管排列整齐，生精细胞层数明显增多；(4) TUNEL结果发现，正常对照组小鼠睾丸内少见TUNEL阳性染色，模型对照组小鼠睾丸内可见很多TUNEL阳性染色细胞，而TFWZ可显著减少小鼠睾丸内TUNEL阳性染色细胞数，明显减轻凋亡；(5) Western blot结果显示，CTX处理后小鼠睾丸内凋亡标志蛋白Caspase-3活化水平较正常对照组显著升高；而五子衍宗方总黄酮可降低小鼠睾丸Caspase-3活化水平；(6)单细胞凝胶电泳实验结果发现，与正常对照组相比，模型对照组小鼠睾丸生殖细胞彗星图像中尾长、尾距、Olive尾矩、尾部DNA％均显著升高；而给予TFWZ后可降低小鼠睾丸细胞彗星尾长、尾距、Olive尾矩、尾部DNA％；(7)免疫组化结果可以看出，模型对照组小鼠睾丸细胞核内DNA损伤标志蛋白γ-H2AX灶点数显著增多；而TFWZ可显著减少小鼠睾丸细胞核内γ-H2AX灶点数；(8) Western blot结果发现，CTX处理后小鼠睾丸内DNA损伤标志蛋白蛋白γ-H2AX、DNA损伤反应蛋白Ku70以及p-P53表达水平较正常对照组显著升高；而TFWZ可降低小鼠睾丸上述蛋白的表达。 结论：TFWZ可减轻CTX生殖毒性，其机制与减轻CTX所致小鼠睾丸生殖细胞DNA损伤进而减少睾丸生殖细胞凋亡有关。