人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响

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目的:观察人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖和凋亡的影响,探讨其机制,为肝癌相关的新药研发和临床治疗提供理论依据。方法:将人肝癌Bel-7402细胞用含10%胎牛血清的高糖DMEM培养基,在37℃、5%CO2培养箱中培养。每2天换液一次,细胞生长至80%时用胰蛋白酶进行消化传代。取对数生长期的人肝癌Bel-7402细胞与人参皂苷Rh2(200、100、50、0μ g·m1-1)在37℃、5%CO2培养箱中培养48h,应用MTT比色法,通过应用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值并计算细胞生长抑制率,从而间接反映人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞增殖的影响;利用流式细胞仪分析人肝癌Bel-7402细胞周期中各时期的细胞百分数;应用TUNEL技术,利用荧光显微镜,在450-500nm波长范围激发荧光,并以细胞核出现强烈荧光作为判断TUNEL阳性细胞的标准,计算细胞凋亡率,从而反映人参皂苷Rh2对人肝癌Bel-7402细胞凋亡的影响;通过Western blot法检测人肝癌Bel-7402细胞中Bcl-2、Bax的蛋白表达。结果:MTT比色法结果显示,将不同浓度的人参皂苷Rh2(200、100、50μg·ml-1)与人肝癌Bel-7402细胞共培养48h后,与阴性对照组比较细胞增殖抑制率分别为:30.25±1.29%、14.14±1.17%、8.27±1.02%,说明人参皂苷Rh2能抑制人肝癌Bel-7402细胞的生长,且在一定程度上呈量效关系;流式细胞仪检测显示,人参皂苷Rh2(200、100、50μ g·ml-1)能使细胞停滞于G1期,百分比分别为:79.3±1.10%、71.2±1.47%、66.1±1.22%,在一定程度上呈量效关系;TUNEL技术检测结果显示,人参皂苷Rh2(200、100、50μ g·ml-1)能有效诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡,凋亡率分别为14.32±1.11%、8.144±1.21%、5.28±1.09%,在一定程度上呈量效关系。Western Blot结果显示,人参皂苷Rh2能上调人肝癌Bel-7402细胞中Bax的表达,下调Bcl-2的表达,在一定程度上呈量效关系。结论:与阴性对照组相比,用不同浓度的人参皂苷Rh2处理人肝癌Bel-7402细胞48h后,细胞中具有抗凋亡作用的Bcl-2表达下降,而促凋亡的Bax表达升高,这也引起了Bcl-2/Bax比值降低。本实验结果提示人参皂苷Rh。诱导人肝癌Bel-7402细胞凋亡的作用可能是通过影响Bax、Bcl-2表达来实现的。人参皂苷Rh2能有效抑制人肝癌Bel-7402细胞的增殖,并能诱导其凋亡,因而在临床治疗肝癌方面有广泛的应用前景。进一步证明了其作用机制至少涉及两方面内容,一是细胞周期阻滞,二是Bel-2和Bax参与调控的细胞凋亡。
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