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目的:研究一个新的含有TPR结构域的HBP21蛋白与热休克蛋白70(Hsp70)的相互作用及作用位点,观察HBP21基因在人视网膜色素上皮细胞及增生性玻璃体视网膜病变(PVR)增生膜中的表达,以进一步探讨HBP21对PVR发生和发展过程中的作用机制。方法:采用RT-PCR的方法,在ARPE-19细胞中克隆出全长HBP21基因,酵母双杂交和GST-pull down探讨其与Hsp70相互作用,进一步通过酵母双杂交和基因定点突变,研究HBP21与Hsp70相互作用位点。并用RT-PCR的方法检测HBP21在ARPE-19细胞及PVR增生膜中的表达。
结果:经RT-PCR和基因序列分析,在ARPE-19细胞中发现了这个新的TPR蛋白HBP21表达,生物信息学分析显示其在人多种组织中表达,在进化上高度保守,酵母双杂交和GST-pull down结果显示HBP21蛋白能够与Hsp70相互作用,酵母双杂交和定点突变,发现HBP21作用的位点为TPR结构域,Hsp70作用的位点为C末端的PTIEEVD或EEVD,RT-PCR结果发现HBP21在ARPE-19细胞中弱表达,在PVR增生膜中高表达。
结论:这个新的Hsp70相互作用的TPR蛋白HBP21可能通过调节Hsp70,产生抑制细胞凋亡的作用。HBP21在PVR增生膜中高表达提示它可能与PVR的发生和发展过程相关。通过TPR蛋白调控Hsp70的表达,进而影响PVR的发展,可能为PVR的治疗开辟了一条新的治疗途径。