【摘 要】
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农业和食品相关产品中的致病菌污染是导致食品安全问题最为突出的因素,对于致病菌的精准检测及按需杀菌,实现致病菌的源头控制,是保障食品安全的关键。人被致病菌感染之后,会患上不同程度的食源性疾病,如:食物中毒、脑膜炎、肺炎、败血症等。食源性疾病的大爆发严重危害民众的生命健康。因此,开发快速、简单、灵敏及特异的食源性致病菌检测及抗菌一体化策略对食品安全具有重要意义。本文基于荧光共振能量转移(FRET)机制
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农业和食品相关产品中的致病菌污染是导致食品安全问题最为突出的因素,对于致病菌的精准检测及按需杀菌,实现致病菌的源头控制,是保障食品安全的关键。人被致病菌感染之后,会患上不同程度的食源性疾病,如:食物中毒、脑膜炎、肺炎、败血症等。食源性疾病的大爆发严重危害民众的生命健康。因此,开发快速、简单、灵敏及特异的食源性致病菌检测及抗菌一体化策略对食品安全具有重要意义。本文基于荧光共振能量转移(FRET)机制,分别构建了功能化的荧光传感与抗菌一体化的智能荧光纳米探针实现食源性致病菌的检测以及光热杀菌、生物膜清除等研究。主要研究内容如下:第一,本研究基于尺寸依赖性合成一批不同粒径的聚多巴胺纳米球(PDANSs),由于其高效的荧光猝灭效率,可作为FRET传感器中的能量受体。其次,利用核酸适配体(Aptamer)对细菌的特异性识别性,将羧基荧光素(6-carboxyfluorescein,FAM)修饰的Aptamer(FAM-Apt)作为该传感器的能量供体,构建了响应型荧光纳米探针PDANSs-FAM-Apt用于金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)的精准检测。基于PDANSs的光热转化性能,该探针也可用于光热杀菌及生物膜清除。荧光纳米探针PDANSs-FAM-Apt检测S.aureus的检测范围为3.3-3.5×10~7CFU/m L,检测限为1 CFU/m L。该探针可用于检测实际食品样品牛奶、果汁中的S.aureus,且回收率为96.84%-104.43%,RSD为1.67%-4.43%。因此,本研究发现了一种灵敏、简单、成本低、特异地检测食源性致病菌的方法,对精准检测致病菌和有效杀菌有重要的理论意义。第二,本工作利用万古霉素(Vancomycin,Van)和Aptamer对于细菌的双识别以及量子点(Quantumdots,QDs)的优良荧光特性构建FRET传感器用于两种致病菌的同时检测。以单增李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,L.M)和S.aureus为待测目标细菌,Van和Aptamer修饰的QDs(QDs-Apt-Van)和PDANSs分别作为传感器中的能量供体和受体,构建了荧光探针PDANSs-QDs-Apt-Van实现S.aureus和L.M的同时检测。该方法中L.M的检测范围为28-2.8×10~7 CFU/m L,检测限为1 CFU/m L;S.aureus的检测范围为46-4.6×10~7 CFU/m L,检测限为1 CFU/m L。该策略用于真实食品样品中回收率为96.4%-103.23%,RSD为1.30%-3.6%。
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