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研究背景：心血管疾病(cardiovascular disease, CVD)是目前全球范围内造成人类死亡的最主要原因之一,其中尤其是冠心病(coronary artery disease, CAD)患者发生急性心血管事件的后果极为凶险。遏制CVD的高发病率和死亡率,关键在于对人群进行CVD发病危险的综合评估与分层,并运用有效的临床诊断指标早期鉴别与诊断出不同CVD危险水平的人群,及早采取相应的防治干预措施。微小核糖核酸(micro-ribonucleic acid, miRNA)是一类可在翻译水平对基因表达进行调控的单链小分子核糖核酸。血清或血浆miRNA具有高度的稳定性、特异性,且取材方便等优点。近期研究显示,血清或血浆miRNA可作为CAD的有效分子标志物,有望实现急性冠脉综合征(acute coronary syndrome, ACS)患者的早期鉴别与诊断。然而目前关于CVD危险分层人群的血清特异miRNA表达谱的研究尚未见报道,且血清特异miRNA与动脉粥样硬化(atherosclerosis, AS)性病变严重程度、血脂异常等的关系尚不明确。因此,筛选出CVD血脂异常危险分层人群的血清特异miRNA表达谱,评估其临床价值,将对临床不同CVD危险水平人群的鉴别与诊断、CVD尤其是急性CVD事件的早期防治均具有重要意义。研究方法：同期收集年龄、性别相匹配的CVD血脂异常危险分层高危组175例[包括ACS组患者89例和稳定性CAD(stable CAD, SCAD)组患者86例]、中危组40例、低危组112例以及正常对照组103例的静脉血清标本。首先采用高通量、高灵敏度的低密度芯片技术(TaqMan(?) Low Density Arrays, TLDA)技术分别对高危组(包括ACS和SCAD组)、低危组以及正常对照组的混合血清(各50例样本)中约667种人源miRNA的表达进行初筛测定；再运用逆转录聚合酶链反应(reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)阳实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)技术对初筛所挑选出的血清miRNA进行小批量样本(包括ACS组30例、SCAD组30例、中危组20例、低危组40例和正常对照组40例)的复筛和大批量样本(包括ACS组89例、SCAD组86例、中危组40例、低危组112例和正常对照组103例)的验证；最后鉴定出在CVD危险分层高危(包括ACS和SCAD患者)、中危和低危人群中显著变化血清miRNA,并分析其与血清氧化低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, ox-LDL)、氧化脂蛋白(a)[(oxidized lipoprotein(a), ox-Lp(a)]、心肌型肌酸激酶同功酶(creatine kinase MB isoenzyme, CK-MB).心肌肌钙蛋白(cardiac troponin T, cTNT)以及冠状动脉Gensini积分之间的相关性,评估其临床应用价值。研究结果：TLDA检测结果显示CVD危险分层高危组和低危组的混合血清中共有82种血清niRNA的表达水平较正常对照组明显升高。根据TLDA检测结果,并参照文献资料,挑选出进行小批量样本复筛的9种血清miRNA,包括miR-208b、miR-499、miR-155、miR-134、let-7b、miR-29、miR-186、miR-146a和miR-320。复筛实验结果显示9种niRNA中血清(?)niR-208b、miR-499、miR-186和miR-146a在高危、中危和低危人群中的表达水平变化最为显著,故对上述4种miRNA进行大批量样本的验证。验证实验结果显示：(1)与正常对照组相比较,CVD危险分层高危组(包括ACS组和SCAD组)、中危组和低危组的血清miR-208b、miR-186、miR-146a表达水平均显著升高(P均<0.05),高危组和中危组的血清miR-499表达水平显著升高(P均<0.05)；(2)在各组CVD危险分层人群中,高危组和中危组的血清miR-208b、miR-499、miR-186表达水平显著高于低危组(P均<0.05)；(3)在CVD危险分层的高危组患者中,ACS组患者的血清miR-186、miR-499表达水平显著高于SCAD组患者(P均<0.05)。进一步分析血清miR-208b、miR-499、miR-186、miR-146a的表达水平与血清氧化脂蛋白、心肌酶谱指标水平以及Gensini积分的相关性,结果显示：(1)在所有CVD危险分层人群(包括高危、中危和低危人群)中,血清miR-208b和miR-186的表达水平与ox-LDL、ox-Lp(a)水平均呈显著正相关(P均<0.05),血清miR-499的表达水平与ox-Lp(a)水平也呈显著正相关(P<0.05)；(2)在所有CAD患者(包括ACS和SCAD患者)中,血清miR-499表达水平与ox-Lp(a)、CK-MB、cTNT水平以及Gensini积分均呈显著正相关(P均<0.05),血清miR-186的表达水平与ox-LDL、 ox-Lp(a)、cTNT水平也呈显著正相关(P均<0.05)。结论：CVD危险分层的高危(包括ACS和SCAD患者)、中危和低危人群的血清中均存在稳定表达的特异血清miRNA;血清miR-208b、miR-499、miR-186和miR-146a可作为鉴别CVD危险分层高危、中危和低危人群的有效生物标志物,有利于CVD危险人群的综合评估与分层；血清miR-499和miR-186可作为ACS和SCAD患者鉴别诊断的有效指标；血清(?)miR-208b、miR-499和miR-186可反映AS性CVD病变的严重程度,与脂质代谢紊乱密切相关。