青果总黄酮的提取分离及药效学研究

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目的:以新鲜青果为研究对象,在前人的研究基础上,筛选青果总黄酮的提取和纯化方法,并进行含量测定;同时研究青果总黄酮的急性毒性作用和抗炎镇痛作用,及体外抗氧化活性,旨在为青果总黄酮的进一步分离及单体的制备提供物质基础和科学依据。方法:在前期的研究基础上,首先采用最佳的提取方法从青果中提取总黄酮类物质:并对其黄酮类物质粗提物进行纯化研究,筛选最佳分离条件;根据理化鉴别和紫外光谱检测其纯化物中具有黄酮类物质的理化特征和光谱特征,可确定青果纯化物可能是黄酮类。其次采用紫外-可见分光光度法对粗提取物和纯化后的青果总黄酮进行含量测定。最后,以最大浓度及最大给药体积的药液对实验组小鼠灌胃给予青果总黄酮,对照组给予等体积的溶媒,测定青果总黄酮的最大耐受量:通过小鼠醋酸扭体法和小鼠热板法,观察青果总黄酮对小鼠的镇痛作用;采用蛋清致小鼠足跖肿胀、二甲苯致小鼠耳廓肿胀、醋酸致小鼠毛细血管通透性增加三种模型研究青果总黄酮的抗炎作用;采用邻二氮菲Fe2+氧化法、邻苯三酚自氧化法、普鲁士兰法三种方法分别测定青果中总黄酮对羟自由基、超氧阴离子的清除能力及总还原能力。结果:青果总黄酮的最佳提取工艺是取青果粗粉按照固液比1:10加入70%乙醇溶液在70℃水浴中回流加热3小时,滤渣重复提取3次,合并滤液,过滤回收溶剂。最佳纯化艺是将提取物上聚酰胺柱,用水洗至无色,再用10%,30%,70%乙醇溶液,以3BV/h速度洗脱,收集溶液,回收溶剂,加压干燥即可。青果总黄酮未见仟何急性毒性反应小鼠灌胃青果总黄酮的最大耐受量为11.46g·kg-1,约相当于成人临床日用量的115倍。青果总黄酮能减少醋酸致小鼠的扭体次数,提高小鼠热板致痛阈值。青果总黄酮对二甲苯致小鼠耳廓肿胀、蛋清致小鼠足跖肿胀、醋酸致毛细血管通透性增加等急性炎症模型均有抑制作用。还具有清除羟自由基和超氧阴离子的能力及一定的总还原能力。结论:通过对青果总黄酮提取和纯化条件的筛选,得到了含量较高的青果总黄酮纯化物。对其急性毒性研究,发现急性毒性很小,且有良好的镇痛、抗炎作用,还具有体外抗氧化活性。这对青果的进一步研究提供了实验依据。
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