HPV16E6E7致敏树突状细胞方法的研究

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宫颈癌在全球妇女癌症发病率中居第二位,每年全球大约有50万例新发病例,约20万人死于宫颈癌。宫颈癌的传统治疗方法一般有手术、放疗、化疗等,但这些手段各有其局限性,也无法达到根治目的,这促使人们一直在探索新的治疗方法。树突状细胞(dendritic cells, DC)是目前已知最强的抗原递呈细胞。近年来,人们对DC在肿瘤免疫治疗中的作用等研究取得了快速发展,大量研究资料表明DC在肿瘤特异性免疫反应过程中起重要作用。致敏DC是DC发挥肿瘤特异性免疫反应的关键环节。因此,本课题以HPV16E6E7致敏树突状细胞为中心,开展了致敏DC方法的研究,即HPV16E6E7基因的重组腺病毒疫苗致敏树突状细胞的方法以及HPV16E6E7体外转录mRNA利用电穿孔的方法致敏DC的研究。人乳头瘤病毒(Human papillomavirus, HPV)是宫颈癌的主要致病因子,约99.7%的宫颈癌发病都与HPV感染有关,而其中又有约50%的宫颈癌与HPV16和18感染相关。在HPV感染与宫颈癌发生过程中,E6和E7蛋白是其主要致癌蛋白,且这两个癌蛋白只存在于癌变组织中,在正常组织中不存在。因而本课题运用分子生物学技术,构建了用于HPV16E6E7基因体外转录的系统及含去除致瘤性位点的HPV16E6E7优化融合基因的重组腺病毒。分别以重组腺病毒感染和体外转录mRNA转染的方法致敏DC,通过观察绿色荧光蛋白的表达和HPV16E6E7蛋白的表达来评价致敏效率效果。结果表明用构建的重组腺病毒感染致敏DC的方法优于体外转录mRNA转染致敏DC的方法。
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