刚地弓形虫(Toxoplasma gondii,T.gondii)是一种对人类危害非常严重的人兽共患原虫,感染期包括包囊、卵囊和速殖子。速殖子依赖于寄生在细胞中生存,对自身的生存环境要求较高,因此目前治疗弓形虫有效的药物主要作用于弓形虫的速殖子阶段。弓形虫感染动物机体主要是在机体免疫力低下时才会表现出临床症状。由于虫体的嗜神经特性,主要的症状表现为弓形虫脑炎(Toxoplasma Encephalitis,TE)以及其他的脑部疾病甚至造成机体瘫痪。但对于脑部疾病而言,钙超载被认为是造成多种脑组织损伤性疾病中神经元损伤的共同通路,钙离子线管通道在神经元的不同部位表达不同,同时不同的钙通道之间还存在相互作用。前期研究中,我们利用iTRAQ技术对感染鼠脑和正常鼠脑进行测序分析选取了差异表达最为显著的脑神经发育调节蛋白(Drebrin,Dbn1)作为诱饵蛋白,调取了Dbn1相互作用的6种蛋白,其中外泌体蛋白占4种,经过qPCR验证其中差异表达较为显著的是ras样蛋白(Rab2),热休克蛋白(Hsp60)。鉴于外泌体的结构及易透过血脑屏障的特点,剖析弓形虫脑病中外泌体与虫体入侵相互作用的机制,需要更深入的研究。本研究中利用PCDH-CMV-EF1a-GFP-puro慢病毒载体构建慢病毒重组质粒CMV-Hsp60和CMV-Rab2制备病毒液脑部注射小鼠通过动物行为学实验如水迷宫、明暗箱和转棒实验观察小鼠的行为有无变化;通过设计引物构建含有HA标签的Hsp60和Rab2的pcDNA3.1(+)真核表达载体,转染小鼠神经瘤母细胞(N2a),检测Dbn1、Bcl-2和LC3Ⅰ/Ⅱ的表达水平。实验结果表明含有Rab2和Hsp60基因的病毒液感染小鼠后行为学与对照组相比认知明显增强,而转染有目的基因的真核表达载体的N2a细胞与对照组细胞相比,在转染后48h发生明显的细胞凋亡,这表明Rab2和Hsp60并未对动物行为学造成显著影响;可能会促进细胞凋亡的发生。在雷帕霉素处理的细胞中虫株感染率增多这可能意味着自噬的发生促进了虫体的入侵和增殖,在自噬发生的后期弓形虫又抑制自噬阻止虫体被细胞自噬作用清除掉,这些研究结果可为弓形虫的预防治疗提供理论依据。