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目的:口腔鳞状细胞癌(Oral squamous cell carcinoma,OSCC)是最常见的口腔恶性肿瘤,对其癌前病变和早期恶变的识别和治疗是OSCC早期诊断和预防的重要措施。在肿瘤的侵袭和转移过程中,蛋白酶和蛋白酶抑制剂起着非常重要的作用。蛋白酶能够降解细胞外基质,而蛋白酶抑制剂具有阻断这一过程的能力。新近发现的丝氨酸蛋白酶抑制剂(serpins)超家族的其中一个成员-Maspin,在乳腺癌、前列腺癌、胃癌等多种肿瘤中已被证实具有肿瘤抑制活性。已有研究表明,Maspin基因通过阻断肿瘤细胞的迁移和增殖,抑制侵袭和转移过程。Maspin基因在绝大多数的人类组织中有不同程度的表达,而在肿瘤的进展过程中多数表现为下调。近年来有报道,Maspin基因有抑制新生血管生成的作用,它能够阻断在体和离体血管的生成,进而降低肿瘤的微血管密度以及抑制肿瘤的生成。另有新的证据表明,Maspin基因与P53基因肿瘤抑制途径相互作用,在部分肿瘤中,Maspin基因的表达与突变型P53基因的水平呈负相关,这表明在体内,Maspin基因可能是P53基因的靶基因。Maspin基因在乳腺、前列腺、结肠和口腔鳞状上皮等正常组织中出现高表达,而在相应的肿瘤组织中表达下调,并与肿瘤的组织学分级、淋巴结转移、局部复发或肿瘤进展、生存期的长短以及突变型P53蛋白阳性等诸多因素相关。这与其具有的肿瘤抑制功能是非常一致的。但也有研究表明,Maspin基因在胰腺癌和卵巢癌中出现异常的高表达,即在正常组织中不表达或者低表达,而在相应的癌组织中则出现表达上调。关于Maspin基因在胃癌组织中的表达有两种截然相反的报道。Maass等在6个胃癌细胞系中并没有检测到Maspin基因的mRNA。而Son等发现肠上皮化生区和胃腺癌的Maspin蛋白表达明显要高于非癌黏膜,并且与mRNA的表达是一致的。本课题对Maspin蛋白在OSCC、癌旁组织和口腔正常组织的表达进行研究,探讨其在口腔鳞状细胞癌发生发展过程中的作用,为临床上的应用提供理论依据。
方法:收集入院前未接受放疗和化疗的OSCC患者的手术切除标本共45例,其中男性32例,女性13例,年龄42~74岁,平均年龄54岁,患者均无其他恶性肿瘤或严重的内科疾病,术前均未经过放、化疗,发生部位:颊部4例,面部皮肤3例,舌缘、舌腹及舌根部15例,口底11例,牙龈6例,下颌骨1例,软腭4例,咽旁1例,按WHO口腔鳞状细胞癌组织分型标准分级,并切除癌旁组织共33例;以唇裂修补术切除的唇部组织及口腔良性病变周围切除组织共15例作为正常对照组织,其中男性8例,女性7例,年龄6月~90岁,平均年龄45.12岁,取材部位:唇部4例,面部3例,口底2例,舌部3例,牙龈3例。所取组织用4%的中性甲醛固定液固定24小时,石蜡包埋,做5um厚的连续切片,用鼠抗人Maspin单克隆抗体以及S-P法进行免疫组织化学染色。Maspin蛋白以细胞核或者细胞浆中出现明显的黄色或棕黄色颗粒为阳性表达;采用半定量积分法判断结果,每张切片随机选5个高倍视野观察,计数100个细胞,若阳性细胞数≤5%为0分,6%~25%为1分,26%~50%为2分,51%~75%为3分,>75%为4分:阳性强度黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分,两者积分相乘,0~1分为阴性(-):2~6分为阳性(+);8~12分为强阳性(++)。将(+),(++)归为表达阳性组计算其阳性率。
结果:1.在口腔正常组织、癌旁组织和口腔鳞状细胞癌组织中Maspin蛋白表达分别为86.66%(13/15),72.72%(24/33)和37.78%(17/45),得x2=15.1843,P=0.0005(P<0.05),差异有统计学意义;2.Maspin蛋白在口腔鳞状细胞癌组织、癌旁组织和相应正常组织中表达是逐渐增高,其中癌组织和正常组织、癌组织和癌旁组织、癌旁组织和正常组织之间表达差异有显著性(P<0.05);3.Maspin蛋白的表达与淋巴结转移有关(z=2.4537,P=0.0141)、(r=-0.37215 P=0.0118)(P<0.05);与组织学分级有关(z=2.2647,P=0.0235),(r=-0.34372,P=0.0208)(P<0.05);与TNM分期无关(z=0.7400,P=0.4593),(r=-0.11374 P=0.4569)(P>0.05)。
结论:1.Maspin基因在口腔鳞状细胞癌的发生发展过程中可能起着重要作用。2.口腔鳞状细胞癌中Maspin蛋白的表达与TNM分期无关,与淋巴结转移、组织学分级有关。3.检测口腔鳞状细胞癌组织中Maspin蛋白的表达水平可能有助于对淋巴结转移潜能的预测。4.检测口腔鳞状细胞癌组织中Maspin蛋白的表达水平可以为组织学分级提供一个参考指标。